瓊脂糖凝膠回收試劑盒(250preps)
產品名稱： 瓊脂糖凝膠回收試劑盒(250preps)
英文名稱： Gel extraction kit
產品編號： DC3511-02
產品價格： 0
產品產地： 美國圣地亞哥
品牌商標： Biomiga
更新時間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國）
- 聯系人 :
- 地址 : 上海市閔行區吳河路328號A棟2樓
- 郵編 : 201109
- 所在區域 : 上海
- 電話 : 400-826-1968 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : tech@biomiga.com.cn
產品說明：
本試劑盒可以簡單、快速、高效的從瓊脂糖凝膠或PCR反應產物中回收DN**段，有效純化長度在100bp-20kb的片段，回收率高達80-90%。
保存條件：
Buffer GC應避光保存，其他組分室溫保存。
使用前請注意：
?
? 使用前請分別在DNA Wash Buffer中加入8 mL (DC3511/DC3514-00) 或者60 mL(DC3511/DC3514-01) 或者96 mL (DC3511/DC3514-02) 或者60 mL (DC3511/DC3514-03) 100% 乙醇。
? 溶解100 mg的瓊脂糖凝膠，約需要100 μL Buffer GC。
? 溶膠液GC 在較低溫度下易沉淀，若溫度較低，出現沉淀，使用前請在37 oC加熱幾分鐘，至沉淀溶解后再使用。
? 本試劑盒所有操作步驟均在室溫下進行。
?
用戶自備材料:
?
? 100% 乙醇
? 臺面離心機和1.5 mL 微型離心管
??55-60 oC 水浴(膠回收時用)
??真空裝置(真空步驟時用)
??小于200 bp的片段的可加異丙醇。
?
PCR產物純化/膠回收離心法操作步驟：
?
1. PCR產物純化：在1倍體積的PCR反應物中加入2倍體積的 Buffer GC，渦旋充分混勻。對小于200 bp的PCR產物，加入5倍體積的Buffer GC。
?
膠回收：將含DN**段的瓊脂糖凝膠切下，轉至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC (100 mg的凝膠加入100 μL Buffer GC)。在55-60 oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解完全，放置使其冷卻至室溫。
?
建議:?
?為取得最好的實驗結果，請使用新鮮配制的電泳緩沖液制膠和電泳。
?切膠時，盡量縮短在紫外燈下照射的時間，以減少紫外對DNA的損傷，并盡量切除不含DNA的凝膠。
?若DN**段小于200 bp，請加入1體積的異丙醇。
?
2.?轉移700 μL DNA/Buffer GC 混合溶液至離心柱中，室溫下，13,000 x g下離心1分種，棄廢液，將離心柱放回收集管中。重復此步使剩余的溶液通過柱子。
?
3.?加入300 μL of Buffer GC到離心柱中，室溫下13,000 x g離心30-60 秒，棄廢液。
?
4.?加入650 μL DNA Wash Buffer （確保已將乙醇按說明書要求加入DNA Wash Buffer中），室溫下在13,000 x g下離心30秒，棄廢液。重復步驟4。
?
4.?13,000 x g開蓋再次離心3分鐘，以去除柱中殘余的乙醇。
注意：此步操作對DNA的產率多少極為關鍵。
?
5.?將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入在60oC 下預熱的30-50 μL Elution Buffer或ddH2O。在室溫下放置1分鐘。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。將洗脫液重新上柱，再次離心洗脫。
?
建議: 將洗脫緩沖液預熱到65 oC，加洗脫液后將柱子整個溫育5分鐘后再離心洗脫可以增加DNA回收效率。
對大于8kb的片段，加洗脫液后將柱子整個溫育15-30分鐘可以提高回收效率。
?
PCR產物純化/膠回收真空/離心法操作步驟
?
?
1.?將含DN**段的瓊脂糖凝膠切下，轉至1.5 mL離心管中，再加入1倍體積的Buffer GC(100 mg的凝膠加入100 μL Buffer GC)。在55-60oC下培育8分鐘左右，且每隔2分種輕彈試管底部，直至膠溶解完全，放置使其冷卻至室溫。
?
2.?準備真空裝置，將柱子與歧管連接。
?
3.?將 DNA/Buffer GC 混合溶液轉移至離心柱。
?
4.?打開真空裝置，溶液流下。
?
5.?加入650 μL的DNA Wash Buffer漂洗離心柱。
?
6.?重復步驟5。再真空抽2分種。
?
7.?將柱子放入收集管，開蓋在最高速離心2分種以除去乙醇。
?
8.?將柱子放入干凈的1.5 mL試管中，向柱中加入30-50 μL Elution Buffer或ddH2O。在室溫下放置1分種。13,000 x g 離心1分種以洗脫DNA。