?核酸服務

?

一、核酸的提取與純化

1、RNA的提取

?

新鮮組織提取效果最佳，其次為液氮和-70℃及組織RNA保存液中保存的樣本，不推薦 使用-20℃及以下溫度下保存的樣本。

?

細菌用量：1-2ml ，需要新鮮培養(公司可代為培養，另行收費)。

植物用量：500mg ，需要新鮮植物葉片。

細胞用量： 10 5 -10 6 ，需要新鮮培養(公司可代為培養,另行收費)。

組織用量： 500mg ，需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。

血液用量： 5ml ，需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。

2、Genomic DNA的提取

?

新鮮組織提取效果最佳，其次為液氮和-70℃保存的樣本，-20℃不宜長期保存樣本，否則提取的DNA長度較短。

?

細菌用量： 10ml收集液，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

植物用量：葉片100mg，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

細胞用量： 10 5 -10 6，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

組織用量： 25mg ，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

血液用量： 5ml ，需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。

酵母用量：10 5 -10 6 或10ml液體培養物，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。

3、質粒 DNA 的小量 / 中量 / 大量提取

?

高拷貝質粒： 10ml 菌液， 25-50 μ g

低拷貝質粒： 20ml 菌液， 15-30 μ g

高拷貝質粒： 100-200ml 菌液， 500-1000 μ g

低拷貝質粒： 100-200ml 菌液， 500-800 μ g

10ml 菌液， 25-50 μ g

?

二、PCR及RT-PCR

1、PCR擴增條件的優化

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

2、常規PCR實驗

?

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

客戶提供模板(可代提取)和引物(可代合成)

3、引物的設計與合成

?

采用兩套以上的軟件設計，保證引物的可靠性。請用戶提供相應

的模板序列，通過 Email 傳送。

OPC ，PAGE，HPLC純化

4、RNA 的反轉錄及 PCR 擴增

?

由用戶提供新鮮制備的模板(可代提取)

由用戶提供引物(可代合成)

三、熒光定量PCR
?

?

服務項目：

常規定性分析：

通過終點法分析樣本中把序列的陰性/陽性，在終點讀板鑒定的同時對擴增過程進行全程跟蹤，可及時發現樣本污

染、假陽性、“弱陽性”等情況，是目前病原體檢測等臨床應用的最佳選擇。同時也是科學研究領域的重要應用技術。

相對定量：

通過對不同樣本靶基因的表達或含量進行檢測，可以判斷不同樣本間靶基因表達的相對高低，是對不同樣本相

同靶基因表達情況的“比較”。

絕對定量：

合成一個和某靶基因具有相同序列的片段(或構建載體)作為標準品，通過測量OD值便可以計算出標準品的摩

爾濃度，不同濃度的標準品在相同體系(即相同擴增效率)下對應的ct值具有高度的唯一性和良好的重復性，可以

作為該基因的“標尺”。通過對未知樣本中該靶基因ct值的檢測，便可由“標尺”測算出未知樣本中靶基因的摩爾

濃度。達到精確定量的目的。

HRM分析：

高分辨率溶解曲線是一種檢測基因突變、進行基因分型和SNP檢測的新工具，可以迅速的檢測出不同樣本中單

個堿基的差異。HRM 檢測技術操作簡便，速度快，高通量，靈敏性好，特異性高，同時對試劑、儀器、軟件及經驗

技術也提出了較高的要求。

檢測方法：

Sybr Green I 染料法：成本較低，并且可以通過溶解曲線發現非特異性擴增。

taqman 探針法：比染料法具有更高的特異性，但成本也相對較高。

其他：除以上兩種常用方法，我公司ROCHE 480 II還可以滿足Molecular beacon、LUX等其他多種方法的檢測。