服務流程

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服務說明

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TUNEL檢測細胞凋亡

? ? ??TUNEL是一種經典的細胞凋亡檢測方法，凋亡細胞會發生DNA雙鏈斷裂，從而在斷裂處暴露出3’-OH基團，利用熒光/化學基團標記的dUTP與3’OH基團結合后，可通過熒光成像/染色反應指示凋亡細胞。

技術原理

? ? ? 細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測細胞凋亡的原理。

吉凱應用實例

? ? ? 用待研基因shRNA慢病毒感染A549細胞，TUNEL染色，結果顯示，shRNA下調目的基因表達后，凋亡細胞顯著增多，表明待研基因與A549細胞凋亡顯著相關。

Caspase3/7檢測細胞凋亡

? ??Caspase3/7?的活性是細胞凋亡指示劑，通過檢測其活性強弱，判斷細胞凋亡情況。

技術原理

? ? ???Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關鍵的執行分子，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基（17KD）和兩個小亞基（12KD）組成，裂解相應的胞漿胞核底物，最終導致細胞凋亡。但在細胞凋亡的晚期和死亡細胞，caspase-3的活性明顯下降。

吉凱應用實例

? ? ? ?用待研基因shRNA慢病毒感染A549細胞，Caspase3/7活動檢測，結果顯示，shRNA下調目的基因表達后，Caspase3/7活性顯著增強，表明待研基因與A549細胞凋亡顯著相關。

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