產品內容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體4.9mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體18.4mL×1瓶，4℃保存。
工作液（在試劑一瓶中配制）：臨用前配制，把試劑二倒入試劑一瓶中，充分溶解（室溫過低時可以40℃水浴促進溶解）；然后把試劑三倒入試劑一瓶中，混勻后室溫保存。
標準液：液體1mL×1支，4℃保存。5mmol/L對**苯胺標準液。
產品說明：
γ-GT是γ-谷氨酰循環中的關鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?；衔锷系?/font>γ-谷氨酰基轉移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃猓a生谷氨酸鹽，在細胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰對**苯胺中γ-谷氨?；D移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對**苯胺，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm光吸收增加速率，來計算γ-GT酶活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：	
一、粗酶液提取：???
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000rpm 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g樣品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液待測。
血清（漿）：直接檢測。 ?
二、測定步驟：
1、?分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至405nm，蒸餾水調零。
2、?工作液置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中預熱30min以上（保證無沉淀）。
3、?標準管的測定：將標準管稀釋為1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.002、0 mmol/L濃度的對**苯胺標準溶液，取0.02ml標準液，加入0.18ml工作液混勻后分別測定其在405nm下的吸光度，記A標準，濃度0記為A空白。計算ΔA標準=A標準-A空白。
4、?樣品測定：
加入試劑（μL）
空白管
測定管
蒸餾水
20
-
上清液/血清
-
20
工作液
180
180
混勻后于405nm測定10 s時的吸光度，吹打混勻后測量130s時的吸光度，記為A1和A2。計算ΔA =A2-A1。計算ΔA測定=ΔA測定-ΔA空白管。
三、γ-GT活性計算：
1、?標準曲線的繪制：
以對**苯胺濃度為橫坐標，ΔA標準為縱坐標，繪制標準曲線，計算標準方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程得x（mmol/L）。
2、γ-GT活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產生1μmol對**苯胺為一個活性單位。
γ-GT（U/mg prot）=x×V樣÷（Cpr×V樣）÷T=0.5×x÷Cpr。
（2）按樣本鮮重計算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每克組織每分鐘催化產生1μmol對**苯胺為一個活性單位。
γ-GT（U/mg 鮮重）=x×V樣÷（W÷V提取×V樣）÷T=0.5×x÷W。
（3）按血清（漿）計算：
活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫升血清每分鐘催化產生1μmol對**苯胺為一個活性單位。
γ-GT（U/mL 血清（漿））=x×V樣÷V血清（漿）÷T=0.5×x。
（4）按細菌或培養細胞計算：
????單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1μmol對**苯胺為一個活性單位。
γ-GT（U/104?cell）=x×V樣÷(500×V樣÷V提取) ÷T=0.001×x。
V樣：加入樣品體積，0.02 mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1mL；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；V血清（漿）：加入血清（漿）體積，0.02 mL；500：500萬細胞。
注意事項：
培養細胞中γ-GT活性測定時，細胞中γ-GT的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞（防止因為蛋白質變性導致酶失活）。
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