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服務步驟

內容

交付內容

交付時間

目的基因全基因合成

1. 從GenBank中尋找目的蛋白的cDNA序列。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子及mRNA二級結構的優化。
3. 合成設計好的基因序列。

目的基因（連接在T載體或其它常規克隆載體上）及測序報告。

2周

目的基因亞克隆

1. 培養并抽提含有目的基因的載體質粒。
2. 將目的基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證表達質粒的準確性。

正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。

2-3周

E. coli 表達菌株轉化及篩選

1.培養并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化至高效的E. coli表達菌株中。
3. 至少挑選3個陽性克隆于LB培養基中擴增并摸索合適的條件，SDS-PAGE 檢測蛋白表達情況，篩選出合適菌株。

重組質粒的表達菌株及表達檢測報告

2-3周

目的蛋白表達及純化

1. 對蛋白表達時間，溫度以及IPTG濃度等表達條件進行優化，并誘導表達目的蛋白。
2. 搖瓶培養1L重組細菌，通過親和層析，離子交換，疏水及凝膠過濾等方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽（可選，注：構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點），再純化獲得所需的目的蛋白。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. .通過Western-blot驗證目的蛋白正確性。

≥1mg純化好的目的蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽或去除純化標簽的目的蛋白，純度最高可達95%以上。?

2-3周

目的蛋白的再加工及詳細檢測

（單獨收費）

1. 對生物學活性要求較高的純化后蛋白產品進行復性研究。
2. 內毒素去除，除菌，凍干等進一步加工。
3. 通過HPLC，質譜等方法詳細檢測目的蛋白的質量

加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。

2-3周