人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C（VEGF-C）ELISA 試劑盒
產(chǎn)品名稱： 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C（VEGF-C）ELISA 試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品編號：
產(chǎn)品價(jià)格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 北京
品牌商標(biāo)： elisa試劑盒
更新時(shí)間： null
使用范圍：
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人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C（VEGF-C）ELISA 試劑盒
英文名稱:Human Vascular Endothelial cell Growth Factor C,VEGF-C ELISA kit
保存:2-8℃，避光保存
規(guī)格:96T/48T
有效期:6個(gè)月
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C（VEGF-C）ELISA 試劑盒
操作流程
1. 加入10 μL 校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、待測樣品到反應(yīng)板孔內(nèi)；
2. 加入100 μL酶標(biāo)抗體工作液到反應(yīng)板孔內(nèi)；
3. 室溫?fù)u床溫育120 min；
4. 洗板6次；
5. 加入1X底物工作液100 μL；
6. 室溫溫育15 min；
7. 加入100 μL終止液，搖勻約5 s；
8. 用波長325 nm/420 nm的激發(fā)/發(fā)射光檢測
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子C（VEGF-C）ELISA 試劑盒
ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：
1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
???? 其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：
???? 用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。
?? 吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進(jìn)行滴定：
?? 即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。
?? 選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
（3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。
??? 然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）
??? 在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。
?? 有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，
??? 應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入