<div id="a1" class="tab-pane active"> <div id="d1" class="p2"> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細胞介紹</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">該細胞采樣于男性年齡不詳，咽，鼻咽部組織分離培養，通過SV40猿猴病毒轉化細胞系，又名NP69SV40T</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細胞特性</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1）&nbsp;來源：咽；鼻咽部</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）&nbsp;形態：上皮細胞樣，貼壁生長</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）&nbsp;含量：&gt;1x106&nbsp;&nbsp;細胞數</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">4）&nbsp;規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">5)&nbsp;&nbsp;用途：僅供科研使用。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>運輸和保存</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>干冰運輸及復蘇好存活細胞</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細胞接收后的處理</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10&times;，20&times;）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。&nbsp;&nbsp;收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。</strong>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; </span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>一．培養基及培養凍存條件準備</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1）<strong><span style="color: #c00000;">準備&nbsp;角質細胞無血清培養基 (推薦：iCell-0019培養基，包含兩個組份：基礎培養基1瓶+生長因子1管：1mL或者5mL兩種）</span></strong><strong>添加對應因子按照收到的生長因子對應規格：1mL加0.2%, 5mL 加1%，同時添加0.2ng/ml EGF；2% FBS ; 1% P/S 來培養細胞。</strong><strong><span style="color: #c00000;">或者&nbsp;準備Defined K-SFM&nbsp;(part of kit NO:,10744-019)同時添加0.2ng/ml EGF；2% FBS ; 1% P/S &nbsp;來培養細胞。</span></strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>備注:</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>1、Defined K-SFM&nbsp;(part of kit NO:,10744-019)培養液包含兩個組份：基礎培養基1瓶500mL（貨號10785-012）+生長因子1管1mL &nbsp;( 貨號10784-015).</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>2、由于角質細胞無血清培養基或者Defined K-SFM為無血清培養液無法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過離心（建議125xg離心5到10分鐘）去除胰酶或者用帶10%血清的培養基來終止消化，再進行后續操作。</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 18px;"><strong>2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 18px;"><strong>3）凍存液：完全培養液92.5%，7.5%DMSO，現用現配。</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">4）傳代比例：如果沒有特別說明，收到細胞后的第一次傳代一般是1:2。傳代周期：4-6天，換液頻率：每周 2-3次。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>二．細胞處理</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>1）&nbsp;凍存細胞的復蘇</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）&nbsp;細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1.&nbsp;棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2.&nbsp;加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，<strong>輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化</strong>。&nbsp;</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>下面T25瓶為例；</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1&times;10^6~1&times;10^7個活細胞/ml.</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1&times;10^6~1&times;10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。</span></p> </div> </div>