封閉血清說明書

Blocking?Serum

規格：10ml

保存：-20℃保存，有效期5年。

產品簡介:???

封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實驗中樣本的封閉?？梢苑忾]待檢樣本中與蛋白質非特異性結合的位點，另外還可以封閉樣品中內源性的Fc片段結合位點，阻斷抗體與樣品中的Fc受體結合，從而降低背景，減少假陽性。在選擇封閉血清時，要注意封閉用血清中不能含有目標蛋白，且與一抗來源不同，可用與二抗相同來源的封閉血清。

使用方法：

使用時，用PBS（0.01mol/L pH7.2-7.4）將正常血清稀釋10-20倍，直接滴加在組織切片或者細胞涂片上，37℃度10-30分鐘，清除血清，勿洗，滴加適當比例稀釋的一抗工作液，37℃孵育1-2h或4℃過夜。

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Western Blot一般流程：

1、蛋白樣品制備：用于蛋白質免疫印跡的樣品為蛋白質的溶解液，可以是純化后的蛋白質樣品，也可以是組織細胞裂解液。

2、蛋白定量：評估電泳上樣量或檢測蛋白含量大小。先總蛋白定量，western后在依據內參定量。

3、電泳：依據實驗目的選擇電泳類型，根據被檢目的蛋白的分子量選擇膠的濃度，制膠，電泳。

4、轉膜：將聚丙烯酰胺上的蛋白質轉移至薄膜上，常用半干轉或濕轉。

5、封閉：選擇適當封閉劑將膜上的蛋白質結合位點封閉阻斷。

6、一抗孵育：一抗與特異性抗原的結合。

7、二抗孵育：二抗與抗原上結合的一抗的再結合過程。

8、底物顯色：二抗一般為標記抗體，根據二抗上的標記物來選擇化學放光或顯色底物等方法進行檢測。

9、圖片分析：標定Marker，進行分析與掃描 。

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