生物素快速標記試劑盒

Biotin Quick Labeling Kit

選購之前客戶需要根據待標記物的分子量大小和標記量選擇最適宜的型號

產品介紹：

本生物素快速標記試劑盒提供了生物素快速標記所需全部試劑，用于含有伯氨基（NH2-）的蛋白/抗體/多肽或者其他大分子的標記。其反應原理如下:

產品特點：

l 使用方法簡單，無需額外準備試劑；

l 節約時間，整個過程僅需 90min；

l 通過離心脫鹽和去除游離的生物素，無需透析或者凝膠過濾；

l 既可用于微量標記又可大量標記，每次可標記 0.2-2mg；

生物素標記使用量的計算：

每個反應中生物素試劑的使用量取決于待標記蛋白質的量和濃度。例如，通過我們實驗數據分析表明，標記2mg/ml 的抗體（IgG ，150KD），使用生物素和抗體的分子比為 20:1 能達到最佳效果；其他蛋白的標記可以根據實際情況，參照此比例類推。

計算公式如下：

其中：V(µL)為生物素的體積；

V1(mL)為待標記物（蛋白/抗體/其他含有伯胺-NH2的大分子）；

C1(mg/mL)為待標記物的濃度；

R 為生物素與待標記物的分子比例；

M為待標記物的分子量（道爾頓，Dalton，Da）

C(mM)為生物素的濃度

計算示例：我們將生物素配置成10mM的濃度，用來標記1mL的2mg/mL 的抗體（IgG ，150KD），準備加入的生物素與抗體的比例為20:1，那么帶入公式計算

實驗前準備：

1.仔細閱讀使用說明書。

2.按照生物素標記使用量的計算的公式計算所需要的生物素的量。

3.提前 20min 從冰箱中取出試劑盒，使試劑盒各組分平衡至室溫。

4.用助溶劑DMSO將活性超級生物素配制成10mM(2mg超級生物素加DMSO 440ul)。

特別提示：

A. 溶解的活性生物素最好一次性使用完，如果使用不完可以密封放在-20℃的冰箱內，一月內可以使用，但是標記效率會降低；

B. 生物素助溶劑使用完之后需要立即密封保存，防止吸潮。

操作步驟：（本操作步驟按照 1mg抗體的量進行標記）

1. 取1mg 待標記抗體于超濾管中，并加入相應體積的標記緩沖液，使抗體的終濃度為 2mg/mL，12,000 x g 離心 10min。

請注意：

A.超濾管的最大體積和最大截留分子量，本實例超濾管的最大體積為 0.5mL；

B.如果待標記抗體濃度低時，可先超濾離心濃縮；

C.如果待標記物含有游離的氨基（Tris,氨基酸或者其他干擾物，需要用標記緩沖液反復超濾確保其去除干凈）

2. 加入13.3µL生物素溶液和適量標記緩沖液至上述超濾管中，使終體積為 0.5ml，并輕輕吹打混勻。放入 37℃恒溫箱中避光溫育 30min。

3. 12,000 x g 離心 10min。

4. 加入適量標記緩沖液至上述超濾管中，并輕輕吹打混勻，12,000 x g 離心 10min， 重復此步驟多次。

5. 收集超濾管中的溶液（即生物素標記的抗體），加入等體積保存液，-20℃保存。

注意事項：

1. 本試劑盒也可標記其它含有氨基（NH2-）的抗原、HRP、多肽，具體標記比例根據待標記物中氨基的數量確定。

2. 本試劑盒中的生物素助溶劑為DMSO ，使用完畢后要密封干燥保存。

3. 本試劑盒未開封前的有效期為18個月，請在有效期內使用;本試劑盒中的生物素加入助溶劑之后，如果使用不完，請密封放在-20℃保存，一周內可以正常使用，如果超過一周，一個月之內使用，使用里量請酌情加大；超過一個月請不要再使用。

4. 請注意試劑盒中提供的超濾管的規格和分子截流大小來確定是否適合您的最佳標記條件；

5. 在步驟 2 中，標記其它抗體時，我們最好控制抗體的終濃度為 2mg/mL，然后再根據抗體的量計算應加入活性生物素的體積。

*本試劑僅供實驗室研究使用

生物素快速標記試劑盒常見問題和解答：

1.生物素與抗體的比例怎么計算？比如說標記1mL的2mg/mL的抗體（100kDa），大概添加比例是多少？

答：一般抗體：生物素=1：20 摩爾比，抗體濃度高比例可以做到1：15，如果濃度低，建議1：20以上，最高可以做到1：50，前提是你必須做到定量是準確的。

2. 在標記過程中離心轉速12000g不會對超濾管有影響嗎？且超濾轉速高時間長抗體會不會流失掉呢？標記的第1和4步說要反復離心的意思可以理解為置換緩沖液，相當于透析嗎？

答：標記的過程中超濾管的離心轉速是12000rpm,不是12000g，當然每個離心機換算會有不同，不會對超濾管有影響，抗體的分子不會穿過超濾管的濾膜流失掉的。多次離心的目的就是要把原來溶液中的緩沖液置換成目的緩沖液，或者是通過反復超濾稀釋，去除掉游離的小分子，和透析的作用是一樣的。對于超濾的效果，主要看每次超濾前體積和超濾后剩余體積，以及超濾次數。