EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
產(chǎn)品名稱： EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
英文名稱： EHA101農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞
產(chǎn)品編號： MCC0104
產(chǎn)品價格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 中國
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時間： 2023-09-13T15:55:12
使用范圍： 僅供科研使用
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EHA101感受態(tài)細胞
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產(chǎn)品編號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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MCC0104 |
EHA101感受態(tài)細胞 |
100μl*10 |
保存條件：-80℃。
1.產(chǎn)品簡介：
基因型C58 (rif R) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA)(kanR,strepR)Nopaline
EHA101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pEHA101(pTiBo542DT-DNA) 型Ti質(zhì)粒含有篩選標(biāo)簽：strep、kan，賦予EHA101菌株鏈霉素抗性和卡那霉素抗性，適用于玉米、水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達104 cfu/μg DNA。
2.使用說明：
1).取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2).每100 μl感受態(tài)加1 μg（體積不大于10μl）質(zhì)粒DNA，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3).加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃，200rpm振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4).6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天。（當(dāng)平板只含有轉(zhuǎn)化所用雙元載體抗生素時，28℃培養(yǎng)48小時即可；平板中同時加入雙元載體抗生素，20μg/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60小時；如果使用的平板含有50μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90小時）。
3.注意事項：
1).加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
2).混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3).利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml，過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計算轉(zhuǎn)化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板同時含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
4).培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
*本試劑僅供實驗室研究使用