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產品信息

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產品描述

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螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）是一種分子量約為61kDa的蛋白，在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中會發出波長為560 nm左右的生物螢光，該螢光可通過化學發光儀進行測定。檢測原理如圖所示：

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圖1：螢火蟲螢光素酶檢測原理圖

Firefly Glo Luciferase Reporter Gene Assay kit是一種輝光型螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒，具有高靈敏度和發光信號穩定的特點，可以滿足高通量檢測螢光素酶在哺乳動物細胞中的表達。

相對于閃光型Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit（Cat#.11401），本品具有以下優點：1）發光信號更穩定性，為實驗設計提供了更大的靈活性。2）采用加樣-混勻-檢測的操作方法，無需依賴自動進樣器，并且無需棄培養液、離心等步驟，大大的簡化了實驗流程。3）無明顯刺激性氣味。

本試劑盒可用于多種常用細胞培養液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均為2h左右（22℃），滿足絕大多數高通量實驗需求。

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產品組分

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運輸與保存方式

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干冰運輸。未拆封試劑盒-20℃保存，有效期1年。

溶解分裝后的輝光型螢火蟲螢光素酶底物于-70℃避光保存1年，或-20℃短期保存不超過1個月。

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使用說明

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1.需自備的材料

單/多道移液器、不透光細胞培養白板、化學發光儀或帶化學發光檢測模塊的酶標儀。

2.檢測試劑準備

首次使用時將輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液一次性全部倒入輝光型螢火蟲螢光素酶底物瓶中，充分混勻后按使用需求分裝，建議-70℃長期保存或-20℃保存不超過一個月。分裝凍存后的檢測試劑，后續每次實驗前需平衡至室溫。

注：輝光型螢火蟲螢光素酶緩沖液可以室溫或水浴融化，但溫度不能超過25℃。

3.操作步驟

1）從細胞培養箱中取出含哺乳動物細胞的培養板，放置5-15 min，平衡至室溫。

2）加檢測試劑：加入與待測細胞培養液等體積并平衡至室溫的檢測試劑（例如，96孔板通常加入100 μl培養液，相應加入100 μl檢測試劑；384孔板通常加入30 μl培養液，相應加入30 μl檢測試劑）。

3）振蕩混勻：為了使得細胞裂解充分，建議在水平搖床上室溫混勻5-10 min（注：不要用移液器吹吸混勻，產生的氣泡會影響發光檢測讀數。混勻時間可根據細胞量進行適當調整，以確保細胞充分裂解，得到穩定的發光檢測結果）。

4）檢測：在化學發光檢測儀或帶化學發光模塊的多功能酶標儀上檢測發光信號，加入檢測試劑后2 h內完成檢測。

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注意事項

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1）反應溫度：酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將檢測試劑以及細胞培養液平衡至室溫（20-25℃）。

2）檢測儀器：能檢測化學發光的儀器都適用，但由于不同儀器的設置和靈敏度不同，測得的光信號值也會不同。

3）檢測板：為防止孔間干擾，推薦使用不透光細胞培養白板。

4）檢測設置：Luminescence，350-700 nm，建議讀板時間設為0.5-1 sec。

5）發光信號會受到檢測環境如培養基組分、溫度等影響，應確保同組內不同樣本檢測條件一致。

6）多個細胞培養板檢測時，請盡量確保每板加入檢測溶液后孵育時間一致，以獲得最佳的檢測結果。

7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套。

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