1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 閃晶生物免費提供如下表達載體：

提供給客戶：正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
價格：免費　
時間：1-2周
步驟3. E. coli表達菌株轉化及篩選：

1. 擴增并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。

提供給客戶：重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。
價格：免費
時間：1周
步驟4. 目標蛋白表達及純化：

1. 搖瓶培養1L重組細菌，誘導表達目標蛋白。
2. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

提供給客戶：純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。
價格：
1. 如果目標蛋白含有親和標簽（His-tag or GST-tag）
5,000元（目標蛋白純度>80，不切除標簽）
5,500元（目標蛋白純度>90，不切除標簽）
6,000元（目標蛋白純度>80，切除標簽）
6,500元（目標蛋白純度>90，切除標簽）
2. 如果目標蛋白不含有親和標簽
8,000元（目標蛋白純度>80）
9,000元（目標蛋白純度>90）
3. 如果沒有獲得目標蛋白，則不收取任何費用(僅限客戶直接提供構建好的質粒時)。

時間：3~4周
備注：
1. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同，我們最終根據實際情況將給客戶提供最少1mg，最多10mg的目標蛋白，所收取的費用是相同的。
2. 我們提供的最終產品一般為保存于常規的緩沖液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液）中蛋白質溶液，并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。
3. 每次Western blot檢測最多7個樣品，因為要加入陽性對照，陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測，如果需要更多次檢測則費用為1500元/次。我們可以免費為客戶提供抗His-tag的一抗，如果客戶需要使用其他一抗，則需要客戶提供。詳見 Western Blot 檢測服務.

其它相關技術服務
多克隆抗體制備服務
熒光定量PCR檢測服務
多肽合成服務
ELISA檢測服務
MGB probe
Protein expression
Polyclonal Antibody

上海閃晶分子生物科技有限公司，主要為客戶提供全面的生物學服務平臺，主要有：
1）基因合成服務：引物設計合成，密碼子優化，DNA測序 , TA克隆
2) RNAi 服務，RNAi 載體構建、RNAi 導入優化和干擾評價
3) 蛋白表達與純化服務，包括哺乳動物、細菌、酵母和病毒表達
4) 多克隆抗體制備和純化：公司擁有cDNA文庫
5) 基因表達分析服務，實時定量PCR ，Western Blot，探針設計合成
6) 克隆服務，包括TA克隆、PCR 克隆和亞克隆、基因突變、載體設計和病毒構建包裝等專業服務
7）多肽合成：
8）細胞轉染：包括細胞培養，MTT檢測，瞬時穩定轉染
9） 我公司還出售微型高低離心機，分子生物試劑，實驗耗材，廣口瓶等。
我們相信自己的經驗、技術與能力將能為客戶提供更“貼心”的產品與服務，將幫助 科研人員快速、高效獲得優質數據，加速生物學、醫學類成果的產生與轉化。
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