Celthy?Univer轉染試劑
產品名稱： Celthy?Univer轉染試劑
英文名稱： Celthy?Univer Liposomal Transfection Reagent
產品編號： C130002
產品價格： null
產品產地： 美國
品牌商標： Arcegen
更新時間： 2025-10-20T09:25:48
使用范圍： null
| 規格 | 價格 |
| 1ml | 1235.0 |
| 0.5ml | 1099.0 |
| 100ul | 239.0 |
- 聯系人 : 孟醒
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- 郵編 : 201314
- 所在區域 : 上海
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產品簡介
Celthy Univer Liposomal Transfection Reagent 是一種多用途的脂質體轉染試劑，適用于 DNA、RNA 和寡核苷酸的轉染，對大多數真核細胞具有很高的轉染效率，且不受血清影響，可完全替代 Lipo2000 轉染試劑。
產品規格
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貨號 |
C130002S/C130002M |
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規格 |
0.5 mL/1 mL |
產品儲存
2~8℃儲存，有效期 1 年。禁止冷凍！
操作注意
1. 本試劑要求細胞鋪板密度較高，以 90%~95%為佳，有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響。
2. 本試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋 DNA 和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。另外，要檢測所用的無血清培養基與脂質體核酸轉染試劑的相容性，已知 CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3. 轉染時，培養基中不能添加抗生素。
4. 使用高純度的 DNA 或 RNA 有助于獲得較高的轉染效率，質粒中的內毒素是轉染的大敵。
5. 陽離子脂質體應該在 4 度保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。
6. 初次使用應優化 DNA 濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例， 通常推薦是 1:2~1:3，比如 24 孔板內接種 0.5~2×105 個細胞，使用 0.5 µg DNA 和 1~1.5 µL 轉染試劑。通過調整 DNA/脂質體核酸轉染試劑比例優化轉染效率，保證細胞密度大于 90%，DNA（μg）: Celthy（μL）比值在 1:0.5~1:5。
7. 本產品僅用于科研。
操作說明
1. 以 24 孔板轉染為例
【注意】：轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度優化最佳使用量。貼壁細胞：轉染前一天（20~24 小時），胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板（不含抗生素），使其在轉染時密度為 90~95%（0.5~2×105cells/well for a 24-well plate）。
懸浮細胞：轉染當天，配制 DNA 復合物之前，24 孔板中細胞鋪板，每 500 µL 生長培養基（不含抗生素） 中加入 4~8×105 cells。
1) 按照以下體系配制 DNA-Celthy2000 脂質體轉染試劑復合物：
a. 對于每孔細胞，使用 50 μL 無血清培養基（如 OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋 0.5 μg DNA?；靹颉?/p>
b. 對于每孔細胞，使用 50 μL 無血清培養基（如 OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋 0.6~2.5 μL Celthy2000 脂質體轉染試劑復合物。
Celthy Univer 脂質體轉染試劑稀釋后室溫孵育 5 min（在 30 min 內同稀釋的 DNA 混合，保溫時間過長會降低活性）。
【注意】：即使脂質體核酸轉染試劑使用 OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用 DMEM 培養。如果 DMEM 作為脂質體核酸轉染試劑的稀釋液，必須在 5 min 內同稀釋的 DNA 混合。
2) 混合稀釋的 DNA 和稀釋的脂質體核酸轉染試劑（總體積 100 µL），輕輕混勻，并在室溫（15~25℃） 孵育 20 min，使得DNA-脂質體復合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染?！咀⒁狻浚篋NA-脂質體復合物室溫至少穩定保存 5 h。
3) 直接將 100 µL DNA-Celthy 脂質體復合物加入到細胞培養板每個孔中，搖動培養板，輕輕混勻?！咀⒁狻浚喝绻跓o血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基，替換為 500 µL 無血清培養基。
4) 37℃，5% CO2 培養箱培養 24~48 h，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換培養基。然而，可能有必要在 4~6 h 后更換生長培養基，不會降低轉染活性。
穩轉細胞株：轉染 24 h 后，按照 1:10 或更高比例在細胞中加入新鮮生長培養基，轉染 48 h 后加入篩選培養基。
懸浮細胞株：在細胞中加入 DNA-Celthy 脂質體復合物后，如果需要可以 4 h 后加入 PMA 和/或 PHA。對于 Jurkat 細胞，PHA 和 PMA 的終濃度分別為 1 µg/mL 和 50 ng/mL，可以提高 CMV 啟動子活性和基因表達。對于 K562 細胞，只加入 PMA 足以提高啟動子活性。
2. 轉染體系的調整
對于不同的細胞培養板，Celthy Univer 脂質體轉染試劑、DNA、細胞和培養基的使用量會有所不同，具體請參考下表（表 1）。對于 96 孔板培養，不需要提前一天進行細胞鋪板，可以直接在平板中制備復合物， 然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過 293-H，293- F， COS-7L 和 CHO 細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低?？旖莸牟襟E和蛋白表達細胞系的高效轉染使得脂質體核酸轉染試劑非常適用于 96 孔板的高通量轉染，比如 cDNA 文庫的篩選和蛋白瞬時表達。
表 1 在不同的培養容器中轉染，脂質體核酸轉染試劑、核酸、細胞和培養基的用量板
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培養容器
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容器每孔表面積
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培養基體積 |
轉染復合物體積 |
DNA轉染 |
RNAi轉染 |
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DNA |
脂質體轉染試劑 |
DNA |
脂質體轉染試劑 |
||||
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96-well |
0.3 cm2 |
100 μL |
2×25 μL |
0.1 μg |
0.2~0.5 μL |
5 pmol |
0.25 μL |
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24-well |
2 cm2 |
500 μL |
2×50 μL |
0.5 μg |
0.6-2.5 μL |
20 pmol |
1.0 μL |
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12-well |
4 cm2 |
1 mL |
2×100 μL |
1 μg |
2-4.5 μL |
40 pmol |
2.0 μL |
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6-well |
10 cm2 |
2 mL |
2×250 μL |
2~4 μg |
5~10 μL |
100 pmol |
5 μL |
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60-mm |
20 cm2 |
5 mL |
2×0.5 mL |
4~8 μg |
10~20 μL |
200 pmol |
10 μL |
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10-cm |
60 cm2 |
15 mL |
2×1.5 mL |
12~24 μg |
30~60 μL |
600 pmol |
30 μL |
1) 不同廠商提供的細胞培養板表面積可能有所不同。
2) 稀釋 DNA 或 RNAi 所用的培養基體積。
【注意】：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時 DNA（μ g）:Celthy（μL）比值保持在 1:0.5~1:5。