T7 RNA Polymerase
產品名稱： T7 RNA Polymerase
英文名稱： T7 RNA Polymerase
產品編號： Frd00030
產品價格： 100ul/516
產品產地： null
品牌商標： Frdbio
更新時間： 2023-12-26T14:01:55
使用范圍： null
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) 產品說明書
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產品名稱 |
規格 |
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) |
100 μL |
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Transcription Buffer (10 ×) |
1 mL |
產品概述
T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是一種對T7噬菌體啟動子具有高度特異性的DNA依賴性RNA聚合酶。該酶以含有T7啟動子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與T7啟動子下游的DNA一條鏈互補的RNA。
產品基本信息
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產品名稱 |
T7 RNA Polymerase |
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來源 |
E.coli |
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活性 |
50 U/μL |
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儲存緩沖液 |
50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.9), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA; 2mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol |
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儲存條件 |
-20℃ |
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反應緩沖液（1X） |
40 mM Tris-HCl, 27 mM MgCl2, 10 mM DTT, 2 mM spermidine |
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酶活定義 |
在37℃ pH8.0的條件下，1小時內使1 nmol的[3H]ATP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位 |
產品應用
用于單鏈RNA合成，包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA前體。以及合成RNA探針，還可以利用帽類似物合成加帽RNA。
實驗流程
1、將各組分解凍分別混勻后，短暫離心使液體收集于管底，置于冰上。
2、體外轉錄體系
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組分 |
用量 |
終濃度 |
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Transcription Buffer (10 ×) |
2 μL |
1 × |
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) |
2 μL |
5 U/μL |
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ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM) |
Each1.5 μL |
Each 7.5 mM |
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Template DNA |
0.1-1 μg |
- |
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RNase Free Water |
up to 20 μL |
- |
3、混勻、離心、37℃反應2-3 h。
4、（選做）向反應體系中加入Dnase I，37℃孵育15 min，消化DNA模板。
注意事項
1、模板DNA的純度對體外轉錄過程影響很大。模板制備過程中的RNase殘留會影響體外轉錄產生的RNA質量。模板DNA應為RNase-Free、高純度，建議OD260/280為1.8~2.0。
2、添加體系時，模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亞精胺，亞精胺濃度過高會引起DNA模板沉淀。
3、反應體系中可添加RNase Inhibitor，防止RNase污染。建議20 μL體系中添加4 U RNase Inhibitor。
4、反應體系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic，提高RNA產量。建議20 μL體系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。
僅供科研實驗使用