T7 RNA Polymerase
產(chǎn)品名稱： T7 RNA Polymerase
英文名稱： T7 RNA Polymerase
產(chǎn)品編號(hào)： Frd00030
產(chǎn)品價(jià)格： 100ul/516
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時(shí)間： 2023-12-26T14:01:55
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 趙經(jīng)理
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) 產(chǎn)品說明書
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) |
100 μL |
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Transcription Buffer (10 ×) |
1 mL |
產(chǎn)品概述
T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是一種對(duì)T7噬菌體啟動(dòng)子具有高度特異性的DNA依賴性RNA聚合酶。該酶以含有T7啟動(dòng)子序列的單鏈或雙鏈DNA為模板，以NTP為底物，合成與T7啟動(dòng)子下游的DNA一條鏈互補(bǔ)的RNA。
產(chǎn)品基本信息
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產(chǎn)品名稱 |
T7 RNA Polymerase |
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來源 |
E.coli |
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活性 |
50 U/μL |
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儲(chǔ)存緩沖液 |
50 mM Tris-HCl (25℃, pH 7.9), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA; 2mM DTT, 0.1% Triton X-100, 50% (v/v) Glycerol |
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儲(chǔ)存條件 |
-20℃ |
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反應(yīng)緩沖液（1X） |
40 mM Tris-HCl, 27 mM MgCl2, 10 mM DTT, 2 mM spermidine |
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酶活定義 |
在37℃ pH8.0的條件下，1小時(shí)內(nèi)使1 nmol的[3H]ATP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位 |
產(chǎn)品應(yīng)用
用于單鏈RNA合成，包括mRNA，siRNA，gRNA等各類RNA前體。以及合成RNA探針，還可以利用帽類似物合成加帽RNA。
實(shí)驗(yàn)流程
1、將各組分解凍分別混勻后，短暫離心使液體收集于管底，置于冰上。
2、體外轉(zhuǎn)錄體系
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組分 |
用量 |
終濃度 |
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Transcription Buffer (10 ×) |
2 μL |
1 × |
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL) |
2 μL |
5 U/μL |
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ATP/CTP/GTP/UTP (100 mM) |
Each1.5 μL |
Each 7.5 mM |
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Template DNA |
0.1-1 μg |
- |
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RNase Free Water |
up to 20 μL |
- |
3、混勻、離心、37℃反應(yīng)2-3 h。
4、（選做）向反應(yīng)體系中加入Dnase I，37℃孵育15 min，消化DNA模板。
注意事項(xiàng)
1、模板DNA的純度對(duì)體外轉(zhuǎn)錄過程影響很大。模板制備過程中的RNase殘留會(huì)影響體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA質(zhì)量。模板DNA應(yīng)為RNase-Free、高純度，建議OD260/280為1.8~2.0。
2、添加體系時(shí)，模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亞精胺，亞精胺濃度過高會(huì)引起DNA模板沉淀。
3、反應(yīng)體系中可添加RNase Inhibitor，防止RNase污染。建議20 μL體系中添加4 U RNase Inhibitor。
4、反應(yīng)體系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic，提高RNA產(chǎn)量。建議20 μL體系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。
僅供科研實(shí)驗(yàn)使用