服務簡介

1.基因敲除(Gene Knockout)

根據給定GeneID或Gene?name，分析基因保守結構域，在保守結構域或客戶指定區域設計靶點并制備靶點gRNA，gRNA共注射使基因產生移碼突變，通過PCR篩選得到穩定遺傳品系。

2. 基因敲除技術特點

??? 2.1 通過將基因敲除斑馬魚品系與野生型相比較，研究者可以揭示特定基因的功能。

??? 2.2 在基因組水平上將目標基因敲除，遺傳背景干凈清晰，是研究基因功能的金標準。

服務流程

▲根據客戶提供的GeneID或Gene?name進行基因分析→▲mRNA和多個gRNA靶點的設計及合成→▲高效gRNA靶點的篩選及效率驗證→▲F0代斑馬魚的可遺傳性篩選→▲雜合子F1代斑馬魚的基因型鑒定。

斑馬魚敲除品系成功案例

1、基因分析

分析目的基因的保守結構域；

2、靶點篩選

設計4個gRNA靶點，PCR檢測包含靶點的區域真實序列，顯微注射驗證靶點效率；

3、大規模注射養殖F0

gRNA 注射，共養殖 F0 約 80 條用于后期Founder篩選；

4、Founder 篩選?

F0代斑馬魚與野生型外交，收集48hpf的F1胚胎抽取基因組，PCR鑒定，測序結果在靶點位置出現雙峰的認為產生突變，然后TA clone驗證其可能產生的突變方式；

5、F1 代篩選

F1代斑馬魚剪尾篩選，TA clone驗證突變方式：

通過對測序圖譜的分析獲得突變方式為：-5bp，產生移碼突變的敲除斑馬魚；

通過對測序圖譜的分析獲得突變方式為：-4-3bp，產生移碼突變的敲除斑馬魚模型。

環特生物優勢

成熟的基因敲除技術快速獲得穩定品系；多靶點共注射F0代驗證基因功能。

環特生物（歆佳醫藥技術團隊）依托國際領先的斑馬魚基因編輯技術，專注于為客戶提供定制化的斑馬魚基因編輯品系構建服務。目前已成功制備超過350個基因編輯品系，測試超過500個gRNA靶點。已為150多家單位提供斑馬魚基因敲入、敲除、沉默、點突變、轉基因服務及斑馬魚疾病模型開發等專業的基因編輯技術服務。

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斑馬魚基因編輯服務，詳細方案及報價，請撥電話咨詢0571-83782130，或者直撥項目經理手機17364531293（微信同號）咨詢。