產品簡介

慢病毒包裝試劑盒（Lentiviral Packaging Kit） 由優化的慢病毒包裝輔助質粒混合物（Lentiviral Mix）、 表達 eGFP 蛋白的對照質粒和高效轉染試劑（Max Transfection Reagent）組成 ，可以兼容第二代和第三 代的慢病毒包裝質粒 ，包裝時間周期短（一周之內即可拿到純化好的高滴度慢病毒）、病毒滴度高 ，可應 用于針對不同基因和藥物靶標的臨床前細胞實驗和動物實驗。

產品規格

組分信息

儲存條件

冰袋運輸。Max Transfection Reagent（C230129-C）于 4℃保存 ，其余組分(C230129-A、C230129-B)均 于-20℃保存。保質期一年有效。

注意事項

1.     為了您的安全和健康 ，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

2.     本產品僅用于科研。

使用說明

1. 慢病毒包裝所需其他材料（選用）

1)     DMEM

2)     FBS

3)     Penicillin-Stretomycin

4)     HEK 293T/293FT：慢病毒包裝及低度檢測所用工具細胞

5)    Antibiotics：用于穩定轉染細胞株篩選 ，如 Puromycin ，G418 等

6)     Competent cells

2. 病毒包裝前的準備

1)     慢病毒表達載體：包含病毒包裝 ，侵染和將病毒重組基因整合到基因組 DNA 中以便表達目的基因或 者 shRNA 的基本元件。

2)     DNA 溶液的制備：質粒 DNA 溶于無菌的 TE 或 ddH2O 中 ，以紫外光吸收法測定其濃度及純度，保證 所提質粒 DNA 的 A260/A280 在 1.8～2.0 之間。

3)     細胞狀態： 良好的細胞狀態對病毒的包裝至關重要 ，避免細胞培養基有細菌、真菌或支原體的污染， 盡量使用傳代次數較少的細胞 ，如果細胞是剛復蘇的話 ，最好傳兩代之后再包裝。

      4)     慢病毒包裝：Arcegen 生物慢病毒載體表達系統由 pGMLV 慢病毒載體和 Lentiviral Mix 質粒組成。

pGMLV 慢載體中含有 HIV 的基本元件 5’LTR 和 3’LTR 以及其他輔助元件，例如 WPRE 和 cPPT/CTS 等。Arcegen 可以根據不同實驗目的針對 pGMLV 載體改造以進行啟動子活性研究、基因表達研究、 RNA 干擾等研究。Lentiviral Mix 能夠表達病毒包裝需要的各種必需成分如：gag 基因 ，編碼病毒主  要的結構蛋白；pol 基因 ，編碼病毒特異性的酶；rev 基因 ，編碼調節 gag 和 pol 基因表達的調節因 子；還含有單純皰疹病毒來源的 VSV-G 基因，提供病毒包裝所需要的包膜蛋白，可以兼容第二代和第

三代的慢病毒包裝質粒。

3. 慢病毒包裝

制備編碼慢病毒顆粒的重組病毒質粒及其輔助包裝原件載體質粒 ，重組質粒載體和輔助質粒載體分別進行 高純度無內毒素抽提，使用 Max Transfection Reagent 進行共轉染 293T 細胞，轉染后 18 h 更換為完全培 養基，培養 48 h 后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，對其濃縮后得到高滴度的慢病毒濃縮液，在 293T 細胞中測定病毒滴度。在一定滴度范圍內的慢病毒顆粒可以滿足大部分體內體外實驗需求。

1)     293T 細胞分盤：轉染前一天，將已經長好的細胞以合適比例傳代到 10 cm 培養皿中，當細胞長到~80% 時準備轉染。

2)     轉染前換液：轉染前 1~2 h 將需要轉染的細胞換新鮮的培養基 ，12 mL/10 cm 皿。注意：293T 細胞 貼壁性不是很好 ，換液時應小心滴加盡量避免沖起細胞。

      3)     轉染：取無菌的 1.5 mL EP 管或 15 mL 離心管 ，按下列組分配制反應體系：

混勻后 ，室溫放置 18 min~20 min 后 ，均勻滴加到提前換過液的培養皿中 ，后置于 CO2 培養箱中培養。

4)     換液：轉染 18~20 h 后，小心吸掉細胞培養液棄于盛有消毒液的廢液杯中（注意：此時培養基中已含 有少量的病毒，必須經處理后才能丟棄，所用的移液槍頭等必須經消毒液浸泡處理后才能丟棄），然 后加 15 mL 新鮮的培養基（也可根據實驗要求換為無血清的 DMEM）繼續培養。

5)     病毒收集：換液 48 h 后 ，吸取細胞上清液于 50 mL 離心管，4℃ ,  500 g 離心 5 min ，上清液用 0.45 μm 濾器過濾后轉移到新的離心管中。此時上清液中的病毒顆?？梢灾苯尤z測滴度或者感染目的細 胞 ，如果對病毒的滴度及純度有較高要求 ，可對上清液進行濃縮與純化。

 6)     病毒分裝與保存：將病毒以 40~50 μL 分裝 ，后保存于-80℃。