服務流程

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服務說明

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MTT MTS CCK8

? ? ? ?反映細胞增殖情況；通常連續檢測5天，獲得細胞增殖曲線；檢測細胞增殖最經濟常用的方法，MTT只適用于貼壁細胞，MTS/CCK8可用于懸浮細胞。

技術原理

? ?活細胞特別是增殖期細胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性MTT（即黃色噻唑蘭）還原成難溶于水的藍紫色針狀Formazan結晶并沉淀在細胞中，且Formazan的形成量與細胞活力成正比，二甲基亞砜（DMSO）能夠溶解Formazan結晶，用酶標儀在特定波長處測定其吸收值，即可間接反映細胞增殖情況。MTS及WST–8（CCK-8試劑）都是新型唑類化合物，和MTT一樣，同樣都能被細胞線粒體中的脫氫酶還原，MTS及WST–8被還原后的Formazan化合物具有高度水溶性，無需再用加DMSO，可直接用酶標儀在特定波長處測定吸收值。

? ? ? 因還原生成的甲臜物數量與活細胞的數量成正比，MTT、MTS、CCK-8均可用于細胞增殖的檢測，目前被廣泛應用于抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。

吉凱應用實例

? ? ? 為研究某基因是否是某腫瘤細胞增殖相關的關鍵基因，可將目的基因shRNA慢病毒感染靶細胞，使靶細胞內源表達的目的基因表達下調，隨后用MTT進行檢測，觀察目的基因表達下調后的細胞與對照細胞相比細胞增殖的變化，從而推斷結論。

? ?用待研基因shRNA慢病毒感染A375細胞，3天后收集細胞，按2000/孔的細胞數量接種細胞至96孔板，第二天待細胞貼壁后，開始進行MTT檢測，連續檢測5天，獲得細胞增殖曲線。結果顯示，shRNA下調目的基因表達后，細胞增殖顯著減緩，表明待研基因與A375細胞增殖顯著相關。

BrdU EdU

? ?可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養加入，而后利用抗BrdU單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。

技術原理

? ? ?? ?溴脫氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine, BrdU）是DNA前體胸腺嘧啶核苷類似物，可競爭性摻入S期細胞單鏈DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶，利用抗體連接酶或熒光素作為指示系統標記BrdU，當處于旺盛分裂的細胞摻入BrdU后，即可檢測出含有BrdU的細胞，并以此判斷細胞的數目。固相包被細胞的微孔中加入BrdU抗體，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的BrdU呈正相關。用酶標儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），通過OD值的高低，反映正在合成DNA細胞數的多少，從而反映正處于增殖狀態的細胞量。

吉凱應用實例

? ? ? ?用待研基因shRNA慢病毒感染T24細胞，3天后收集細胞接種96孔板，待細胞貼壁后第一天和第四天進行Brdu檢測，結果顯示，shRNA下調目的基因表達后，細胞增殖顯著減緩，表明待研基因與T24細胞增殖顯著相關。

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