?一、產品介紹：

金屬螯合親和層析色譜，又稱固定金屬離子親和層析色譜，其原理是利用蛋白質表面的特定氨基序列，如6 X His能與多種過渡金屬離子Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+發生特殊的相互作用，利用這個原理可以把帶有這類特定氨基酸序列的蛋白質吸附，再使用不同濃度的競爭物洗脫，從而達到分離的目的?；谶@個原理，偶聯有這類金屬離子的瓊脂糖凝膠就能夠對這些含有特定氨基序列的蛋白質或者與金屬離子具有吸附作用的多肽、核苷酸等進行有效的分離。半胱氨酸和色氨酸也能與固定金屬離子結合，但這種結合力要遠小于組氨酸殘基與金屬離子的結合力。

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二、產品技術指標：

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說明：本產品可用于可溶性表達帶6XHis標簽蛋白的純化，也可用于溶解的帶6xHis標簽的包涵體蛋白的純化。降低溶液的pH值或者提高溶液中咪唑的濃度可使結合于Ni離子的目標蛋白從瓊脂糖介質上洗脫。IDA分子是一種三價金屬離子螯合劑，與Ni離子形成三根配位鍵，固定化的Ni離子通過剩余的三個鍵合軌道與目標蛋白的組氨酸標簽發生特異性結合。相比較NTA介質，IDA對蛋白支的結合能力較強，因此，需要洗脫的咪唑濃度要高。IDA-Sepharose是最經典最穩定的金屬螯合親和層析介質，配基脫落少，價格實惠，被廣泛用于工業級別生產。

三、操作建議：

Buffer A(結合緩沖溶液)：20mM Tris-cl，300mM Nacl，10mM 咪唑，PH8.0;

Buffer B(洗脫緩沖溶液)：20mM Tris-cl，300mM Nacl，500mM咪唑，PH8.0;

上樣流速：100cm/h（AKTA、蠕動泵）；

洗脫條件：10%B，20%B，50%B，100%B。

洗脫流速：150cm/h---300cm/h（AKTA、蠕動泵）。

注：目的蛋白主要在50%B，10%B洗雜。

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四、操作步驟：

? 1、 取10mlNi-MicroroseC凝膠倒入抽濾器中，用5—10個體積的去離子水抽洗干凈，去除殘留的乙醇。

? 2、 將清洗干凈的凝膠裝入1.6 X 20CM層析，柱高3—5cm。

? 3、 螯合NI離子，用濃度為0.1M的硫酸鎳以3ml/min的流速沖洗層析柱。

? 4、 平衡，用Buffer A（結合緩沖液）平衡層析柱 2-5 個床體積，流速為5ml/min

? 5、 上樣，將細胞破碎上清用0.45μm 濾膜過濾后上樣， 流速3ml/min

? 6、 漂洗，用buffer A沖洗層析柱3-5個床體積，流速為 3ml/min

? 7、 洗脫，用分別含有10%B、20%B、50%B、100%B（50mM，100mM,250mM,500mM咪唑）buffer B 進行階段洗脫，流速為 5ml/min，收集各階段洗脫峰。

? 6、 去離子水沖洗層析柱 5--10 個柱床體積，再用 20%的乙醇流洗 3 個柱床體積，流速為5ml/min，層析柱充滿20%乙醇后可以置于+4~8℃環境中保存。