ActSep®CD3/CD28分選激活磁珠（ActSep^®CD3/CD28Separation & Activation Magnetic Beads)

產品貨號：1mL / GMP-TL603-1000 

               5mL / GMP-TL603-5000

♦預期用途

ActSep® CD3/CD28 分選激活磁珠可用于分選人 CD3 +T 細胞，并提供了一種不需要抗原呈遞細胞或 抗原就能激活和擴增 T 細胞的簡單方法。通過在磁珠上偶聯抗 CD3 和抗 CD28 單克隆抗體，提供 T 細胞激活和擴增需要的初級和協同刺激信號，實現 T 細胞的分選、激活和擴增。此款磁珠適用于 人 T 細胞、CAR-T 等多種 T 細胞培養技術的應用。適用于生產細胞治療產品。

♦ 產品特點

1、 分選、激活于一體，省時高效

2、4.5μm超順磁珠，與細胞大小匹配

3、方便分離，易操作

4、高穩定性、高安全性

5、產品符合ISO9001和ISO13485質控要求

♦ 反應種屬

人

♦ 濃度

2×10⁸beads/mL

♦內毒素

<0.5EU/mL

♦ 含量

1mL

♦ 性狀

棕色懸濁液體

♦ 儲存條件

2~8℃

♦ 有效期

24個月

♦ 使用方法

1. PBMC 細胞處理：

  1.1 將人的PBMC細胞重懸于含1% HSA的PBS緩沖液中，取樣計數并標記CD3進行流式檢測。

  1.2 根據PBMC細胞CD3陽性率用含1% HSA的PBS緩沖液調節CD3 ⁺T細胞密度至1×10⁷個/mL。

2. ActSep^® CD3/CD28分選激活磁珠的清洗： 

  2.1 重懸磁珠（渦旋不低于30s，或者顛倒混勻5 min）。 

  2.2 按照磁珠數和CD3 +T細胞孵育比例，取出所需磁珠量，轉移到離心管中。（推薦使用比例為 1:1，可根據實際工藝在1:1-3:1的范圍內進行調整，隨著磁珠量的增加，CD3 +T細胞分選效率會隨 之提升，細胞的激活及擴增效果也會有所差異。）

  2.3 向上述離心管中加入l mL 含1% HSA的PBS緩沖液，將磁珠進行重懸，吹打或渦旋進行潤洗。 

  2.4 將上述裝有重懸磁珠的離心管放在磁力架（磁珠專用）上，靜置 1 min，棄去上清，注意不要吸取到磁珠。

3. 磁珠分選和激活CD3⁺T 細胞： 

  3.1 向上述洗滌后的磁珠中按比例加入調整好 CD3⁺T 細胞密度的 PBMC，混合均勻。

  3.2 將上述離心管置于轉速 15~20 rpm 的混樣儀上，室溫孵育 30 min。 

  3.3 將上述離心管放在磁力架（磁珠專用）上，靜置 1min 后，棄上清。（或可收集上清并進行 計數和流式檢測，標記 CD3，用以評估分選效率。） 

  3.4 用含200 IU/mL rh IL-2（同立海源, Cat: GMP-TL777）的完全培養基（客戶可根據自身實際 實驗條件進行調整，根據實驗需求明確是否使用自體血漿）重懸磁珠和細胞的混合物，并調整細 胞密度為0.5~1×10⁶個/mL。 

4. 細胞的擴增和培養：

觀察細胞狀態并定期補液，調整細胞密度至 0.5~1×10⁶個/mL（根據需要進行流式檢測）。將細胞 培養至適宜時長（一般 12~14 天）后即可收獲細胞。

♦ 實驗數據

♦ 參考文獻

1. David M Barrett, Nathan Singh, Xiaojun Liu, Shuguang Jiang, Carl H June, Stephan A Grupp, Yangbing Zhao (2014). Relation of clinical culture method to T-cell memory status and efficacy in xeno graft models of adoptive immunotherapy. Cytotherapy. 16(5):619-30. 

2. Barbara Tumaini, Daniel W Lee, Tasha Lin, Luciano Castiello, David F Stroncek, Crystal Mackall, Alan Wayne,Marianna Sabatino. (2013). Simplified process for the production of anti-CD19-CAR-engineered T cells. Cytotherapy 15:1406-1415.

♦ 注意事項

1. 細胞擴增后需定期輕輕吹打培養容器中的細胞懸液，以便充分分散磁珠和細胞。 

2. 培養過程中，可以每 2~3 天進行細胞計數，細胞計數前均需去除磁珠，去除磁珠過程：將細胞 培養器中的細胞混懸均勻后取樣至離心管中，將其放在磁力架（磁珠專用）上，靜置 1 min，取上 清至新的離心管。 

3. 細胞培養至適宜天數后，需去除磁珠后收獲細胞。 

4. 細胞培養過程中通過流式細胞術對 T 細胞的純度、表型、活化狀態進行檢測。（如，可在細胞 磁珠混懸液培養 48h 后取樣去除磁珠，計數并測試 T 細胞膜上 CD69 +CD25 +的表達變化，以評估激 活效率。）

 For research and manufacturing use.