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<div id="a1" class="tab-pane active"> <div id="d1" class="p2"> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細(xì)胞特性</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1）&nbsp;來(lái)源：人卵巢</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）&nbsp;形態(tài)：上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）&nbsp;含量：&gt;1x10^6&nbsp;&nbsp;細(xì)胞數(shù)</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">4）&nbsp;規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">5)&nbsp;&nbsp;用途：僅供科研使用。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>運(yùn)輸和保存</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>細(xì)胞接收后的處理</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。 </span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10&times;，20&times;）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">4）<strong>備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。&nbsp;&nbsp;收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。</strong>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; </span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 18px;"><strong>1）&nbsp;準(zhǔn)備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 18px;"><strong>2）&nbsp;培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）&nbsp;凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>二．細(xì)胞處理：</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>1）&nbsp;凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2）&nbsp;細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1.&nbsp;棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2.&nbsp;加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。&nbsp;</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;"><strong>下面T25瓶為例；</strong></span></p> <p><span style="font-size: 18px;">1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1&times;10^6~1&times;10^7個(gè)活細(xì)胞/ml.</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1&times;10^6~1&times;10^7個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。</span></p> <p><span style="font-size: 18px;">3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。</span></p> </div> </div>