蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

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實驗技術簡介:

雙向電泳(two-dimensional electrophoresis)是等電聚焦電泳和SDS -PAGE的組合，即先進行等電聚焦電泳(按照pI分離)，然后再進行SDS-PAGE (按照分子大小)， 經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。

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實驗原理:

雙向電泳是目前為止zui有效、使用最多的蛋白分離方法。差異蛋白質組學是在雙向電泳后用考麻斯亮藍、銀離子或熒光染料等將蛋白斑點染色,然后比較差異。本公司在各類微生物、培養細胞、動植物組織(如動物軟硬組織、體液、植物種子、葉子等)、亞細胞組分的雙向電泳分離及后續質譜鑒定中均有豐富的經驗。

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蛋白質組學雙向電泳技術服務項目:

1.根據客戶需求定制蛋白質組學實驗方案

2.各種規格膠條長度的雙向電泳

3.考麻斯亮藍染色、銀離子染色; .

4.DIGE系統雙向電泳。

5.圖像分析

6.切膠質譜分析

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服務說明:

1.我們的實驗只對我們制作的樣本負責,如您提供的是直接做等點聚焦的樣本，我們不敢保證蛋白的有效分離。

2.蛋白質組學實驗的總體實驗流程;

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實驗流程:

1、樣本制備

2、固相預制膠條水化

3、第--向等電聚焦(IEF)

4、膠條平衡→第二向SDS-PAGE電泳

5、凝膠染色檢測

6、圖片掃描

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雙向電泳服務結果提交:

1、實驗的試劑耗材、儀器設備、操作過程--份;

2、實驗結果凝膠掃描圖片;

3、電泳凝膠(可收費干膠) ;

4、剩余樣本。

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說明:

1.樣品制備指可用通常程序處理的原樣，如樣品較特殊(需要去除核酸、鹽等雜質或需要濃縮)，價格將視進一步處理的難度和耗材用量另行商定;

2.建議客戶提供的原樣(組織、細胞、菌體等)濕重不少于100mg如直接提供蛋白提取物，則濃度不少于4ug/ul,總量不少于5mg;

3.樣品的還原和烷基化過程一般在制備時進行;

4.圖象處理與切膠主要是手I操作成本。

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客戶方需提供:

細胞，組織或蛋白。

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實驗周期:

5-10天

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可提供技術支持: .

1、從現有的生物有機體基因組中,經過酶切消化或PCR擴增等方法，獲得帶有目的基因的DNA片段。

2、在體外，將帶有目的基因的外源DNA片段連接到具有選擇標記的載體分子上,形成能夠自主復制的重組DNA分子。

3、將重組DNA分子轉移到適宜的受體細胞，并使其一起增殖。

4、從大量的細胞繁殖群體中，篩選出獲得了重組DNA分子的受體細胞克隆。

5、由篩選出來的受體細胞克隆，提取出已經得到擴增的目的基因，供進一步分析研究使用。

6、將分離到的目的基因克隆到表達載體上，導入受體細胞，使之在新的遺傳背景下實現功能表達，產生出人類所需要的物質。

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