操作簡單：可一步實現DNA的片段化和接頭連接，僅需9 h即可實現從細胞到二代測序文庫的轉化

超高活性：兼具Protein G&Tn5活性，DN**段化活性極高

細胞起始量低：可兼容低至60個細胞，甚至單細胞

純度高：蛋白純度高、核酸殘留低

1. CUT&Tag技術原理及應用

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術，與后者相比，它具有顯著優勢，如：信噪比高，可重復性好，實驗周期短（1天實現從細胞到文庫構建），細胞投入量低等，尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。

CUT&Tag技術的實驗流程簡單，主要包括：①收集細胞；②分別孵育一抗和二抗；③孵育pA/pG-Tn5轉座子（Hyperactive??pA/pG-Tn5 Transposon）；④激活轉座子，進行DN**段化；⑤DNA提??；⑥文庫擴增與純化。

2. 轉座子切割活性高

如圖所示，對Vazyme #TD901中提供的pG-Tn5轉座子進行活性檢測，投入50 ng 人基因組DNA（gDNA），1 μl轉座子可快速（10 min）實現DN**段化，說明該融合酶切割DNA活性很高。

3. 細胞起始量低

A: CUT&Tag峰形圖

如圖A所示：投入不同起始量的HEK293細胞（100或10,000個細胞），按照Vazyme #TD901說明書推薦的反應體系進行CUT&Tag實驗；其中，pG-Tn5轉座子使用的終濃度為0.04 μM，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271）。通過使用Agilent 2100 Bioanalyzer進行文庫分布檢測，結果顯示對于不同細胞投入量（100個或10,000個細胞），均可構建出與文獻中類似的呈現Ladder狀的文庫，說明該體系能夠兼容低細胞起始量的實驗。

B：Peak 富集

如圖B所示：將圖A中的CUT&Tag文庫進行二代測序分析，可以看出，100個細胞可以達到與10,000細胞類似的Peak富集，且信噪比顯著高于ChIP-Seq。

4. 實驗重復性好

如上圖所示，投入不同起始量（1,000、10,000或100,000）的HEK293細胞，每種起始量做2個重復，按照Vazyme #TD901說明書推薦的反應體系進行CUT&Tag實驗；其中，pG-Tn5轉座子使用的終濃度為0.04 μM，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271），陰性對照為與一抗同源的IgG（CST，#2729）。對上述文庫樣本進行二代測序，針對富集的reads進行pearson相關性分析，可以看出，平行樣本之間的重復性較好。

Hyperactive??In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina是針對CUT&Tag技術定向開發的專用試劑盒。CUT&Tag技術是一種研究蛋白質-DNA互作的新方法，通過將Protein G或Protein A與經過工程學改造的超高活性Tn5轉座酶融合，形成兼具雙重活性的新型融合酶(Hyperactive??pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase)，在抗體引導下精準靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。與傳統的ChIP-Seq相比，該技術具有細胞投入量低、實驗周期短、信噪比高、可重復性好等優勢，尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。試劑盒中所有試劑都經過嚴格的質量控制和功能驗證，最大程度上保證了文庫構建的穩定性和重復性。

BOX 1：ConA beads 2 ~ 8℃保存，其余組分室溫儲存。

BOX 2：5% Digitonin -30 ~ -15℃保存，室溫下可保存1周；

10 × Binding Buffer -30 ~ -15℃保存，2 ~ 8℃下可保存6個月；

其余組分-30 ~ -15℃儲存。