產品簡介

本品可直接快速地對小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾、肌肉等）樣本進行PCR擴增，具有極強的樣本兼容性。本試劑盒配備了強力的裂解緩沖液，可以快速裂解樣品，釋放基因組DNA。裂解液可以直接加入到PCR反應體系中，無需精提純化，操作方便。此外，本試劑盒對樣品投入量要求低，5 mg小鼠組織或1-5 mm鼠尾即可進行實驗。

本試劑盒提供的2× Mouse / Tissue Direct PCR Mix為2倍濃度的熱啟動PCR反應液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。且含有示蹤染料，PCR產物可直接電泳。該試劑盒可用于轉基因鑒定、小鼠基因分型等。

產品規格 

組分信息

【注】：

1) Buffer ML為裂解緩沖液，包含強力蛋白變性劑，請戴手套操作。

2) Buffer MT為終止緩沖液，用于終止Buffer ML的裂解功能。

3) 2× Mouse Direct PCR Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑、穩定劑和電泳指示染料等。

產品儲存

1. 組分A【Buffer ML】，2-8℃保存。如長時間未使用，請分裝凍存，避免交叉污染。

2. 組分B【Buffer MT】，-25~-15℃保存，避免反復凍融。

3. 組分C【2× Mouse Direct PCR Mix】，-25~-15℃保存，避免反復凍融。

4. 試劑盒有效期1年。

操作注意

1）本產品PCR產物不適用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。

2）為了避免樣本間交叉污染，每次取樣后都需要將取樣器材的刃口或與樣本直接接觸的部位浸入2%次氯酸鈉溶液中，反復洗刷數次進行清洗，然后用干凈的紙巾擦干殘余液體后再進行使用。為了試驗方便，也可準備多個取樣器材，在使用完后進行統一清洗，確保每一單獨樣本均使用的是無污染的取樣器材。

3）建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。

4）建議擴增片段長度1 kb以內，以便擴增效率最佳。

5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

6）本產品僅作科研用途！

操作說明

樣品基因組DNA釋放

1. 剪取5-10 mg動物組織或1-5 mm鼠尾，置于1.5 mL離心管中；

【注】：組織應盡量剪碎，以便裂解反應更順利進行。

2. 在上述離心管中加入90 μL Buffer ML，輕輕渦旋使得樣品完全被裂解液浸潤，短暫離心；

3. 在恒溫孵育儀中設置95℃孵育15 min；

【注】：95℃孵育，一般15 min即可滿足多數PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至30 min。組織塊不需完全裂解，殘余的部分在后續離心步驟中可被除去。

4. 加入10 μL Buffer MT，輕彈混勻，終止裂解;

5. 選做步驟：12,000 rpm離心2 min；

6. 將上清轉移至新的離心管，4℃或-20℃保存或直接取上清用于后續PCR擴增。

PCR反應鑒定——PCR反應體系

表1. PCR反應體系

【注】：各組分使用前應充分混勻。

a）模板使用量：建議按1-10%總體系量取用模板，20 μL體系建議采用1 μL上清液作為模板；

b）引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度；

c）反應體系：推薦使用20 μL，也可根據使用習慣調整體系體積大?。?/p>

d）體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。

PCR反應鑒定——PCR反應程序

表2 PCR反應程序

【Note】：*退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設置低于引物理論值2-5℃，或通過梯度PCR確定最佳溫度。

**延伸時間：請按30 sec/kb設定。

***擴增循環數：35個循環已可以擴增足量產物。

電泳上樣：取3-5 μL擴增產物上樣即可。

對照反應：在PCR結果分析時，不管是陽性結果或陰性結果，如果沒有對照反應，都不能確定結果是否可靠。為了便于后續實驗結果的分析，建議在進行PCR時，設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。