從多種樣本中得到高產量DNA，可用于多種應用

REPLI-g Mini Kit可用于多種樣本，包括基因組DNA、新鮮或干血、新鮮或冰凍組織、細胞。50 μl反應體系的常規DNA產量可以達10 μg（參見Consistent DNA yields using any sample type）。不同的模板質量均可擴增得到同樣的DNA產量（參見Uniform DNA yield from various amounts of template）。從不同的模板濃度獲得一致的DNA產量十分要，對于高通量應用而言尤其如此，在下游的基因分析中不需要純化或定量。

產物平均長度大于10 kb，在2 kb到100 kb之間，因此能夠用于復雜的限制性酶切和長片段PCR等下游應用。REPLI-g擴增的DNA十分適用于基因分型，如使用TagMan引物/探針對的SNP基因分型（參見Reliable SNP genotyping ），測序和STR/微衛星分析（參見Accurate genotyping）。

成功應用于二代測序

許多文獻已展示了REPLI-g技術擴增的DNA在二代測序中的成功應用，包括腫瘤細胞的外顯子組測序、全基因組測序、宏基因組學的研究、以及單細胞分析。對于將全基因組擴增DNA用于二代測序一直有一些爭論，因此我們檢測了可能影響全基因組擴增DNA在下游應用中表現的影響因素。我們發現：起始材料的質量對二代測序實驗有很大影響。如果使用的是低質量DNA（如降解的DNA），或長時間保存的組織材料，用擴增獲得的DNA進行二代測序則無法獲得可靠結果。但是，對完整細胞或未降解的純化后DNA使用REPLI-g技術進行全基因組擴增，然后用于二代測序，結果可與純化的基因組DNA的測序結果相媲美。分析測序結果的各基因組位點和錯配率得出結論，全基因組擴增后垃圾DNA水平低，擴增獲得的DNA和純化獲得的DNA的錯配率基本相同（參見Comparable NGS (next-generation sequencing) results obtained using purified gDNA or REPLI-g amplified DNA）。

高度可靠的全基因組擴增

REPLI-g技術提供高度均一的全基因組擴增。Phi29聚合酶可復制長達70 kb的DNA，而不會從DNA模板上脫離（參見Schematic representation of REPLI-g amplification）。與基于PCR的全基因組擴增技術不同，Phi29聚合酶具有3→5外切酶校對活性，在復制過程中的高保真性是Taq DNA聚合酶的1000倍。試劑盒中提供的抗外切酶的引物可確保DNA的高產量，優化的全基因組擴增緩沖液體系適用于長片段DNA，對各位點進行均一的擴增。

REPLI-g技術的性能優于基于PCR的全基因組擴增技術

傳統方法擴增基因組DNA需要進行耗時的EBV轉化細胞系步驟，并用隨機或變性的寡聚核苷酸引物進行全基因組擴增?；赑CR的方法（如：DOP-PCR和PEP）會產生非特異性的擴增產物，不能完全覆蓋所有位點。有時，產生小于1 kb的DNA，在許多下游應用中都無法使用。由于使用低保真酶Taq DNA聚合酶，產物DNA突變率較高，擴增易出錯，會導致堿基對突變。REPLI-g技術沒有這些缺陷，并能夠高度均一的擴增全基因組，位點偏差小、錯配率小（參見Highly representative amplification using REPLI-g technology and Consistent and accurate whole genome amplification）。

獨特的REPLI-g技術使用創新的高保真酶Phi29聚合酶，利用多重置換擴增（MDA）技術擴增復雜的基因組DNA，并結合溫和的堿變性，均一的擴增基因組位點。REPLI-g Mini Kit的常規產量為10 μg，如需更多產量，可使用REPLI-g Midi Kit；因為這兩個試劑盒的實驗方案相同，反應體積也相同。反應體系構建十分簡便，僅需約15分鐘的手動操作時間，因此REPLI-g技術使用簡便、可靠，適用于對少量或珍貴的樣本進行完全、均一的擴增。

擴增原理

REPLI-g利用等溫基因組擴增，即多重置換擴增（MDA）技術：隨機引物與變性DNA結合，在等溫環境中，在Phi29聚合酶的作用下，進行置換合成反應。每個置換的單鏈作為模板，與引物結合，擴增生成高產量的DNA（參見Schematic representation of REPLI-g amplification）。Phi 29聚合酶為噬菌體衍生酶，具有3→5外切酶活性，準確性為Taq DNA聚合酶的1000倍。Phi29聚合酶與獨特的REPLI-g緩沖液體系相配合，能夠輕松的打開DNA的二級結構，如發卡結構，所以可確保在擴增過程中，聚合酶正常發揮作用。因此該技術生成的DN**段長度可達100 kb，沒有序列偏差（參見Unbiased amplification with Phi29 polymerase）。

DNA的堿變性

在酶擴增前，必須使基因組DNA變性，這通常是通過高溫孵育、或在強堿性條件下進行的。REPLI-g Mini Kit采用溫和的堿性環境孵育，使DNA變性，而片段化程度低，突變少。由此擴增獲得的DNA十分完整，擴增的片段長，覆蓋所有基因組位點和序列。使用REPLI-g Mini Kit能夠獲得可靠的結果，確保在下游應用中不出現假陽性或假陰性結果。采用熱變性的WGA技術會損傷模板DNA，導致擴增結果不準確（參見Effect of heat and alkaline denaturation on loci representation）。

便利的單管操作

REPLI-g Mini Kit通過簡便、高效的方法從純化的少量基因組DNA樣本或直接從全血、干血卡、白膜層、組織、培養的細胞中進行準確的全基因組擴增（參見REPLI-g Mini and Midi procedure）。加入裂解緩沖液使樣本DNA裂解并變性，之后進行短暫孵育（參見REPLI-g Mini and Midi procedure）。中和后加入預混液（包括REPLI-g Mini DNA Polymerase），在30°C過夜進行等溫擴增。REPLI-g擴增獲得的DNA刻在–20°C長期儲存（參見Consistent long-term stability）。

• 使用TagMan引物/探針對的SNP基因分型
• 基于定量PCR或PCR的突變檢測
• 二代測序
• STR/微衛星分析
• Sanger測序
• RFLP和Southern印跡分析
• 芯片技術，如比較基因組雜交