細胞穩轉株的構建和篩選的技術
產品名稱： 細胞穩轉株的構建和篩選的技術
英文名稱： VIRUS-Free™
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VIRUS-Free??是一種利用轉座子系統進行細胞穩轉株的構建和篩選的技術，以替代慢病毒感染構建穩轉細胞株的技術。其載體中包括了轉座子的識別區域，在轉座酶的催化下，將目的片段從載體上或者BAC分子上切割下來形成一個小環結構，并在基因組里面的固定序列位置進行插入，從而實現穩轉。目前已經在CAR-T細胞治療中得到較多的臨床應用，并充分體現出其：低成本、高效率、基因表達穩定的特點。
|? ?技術優勢
1.序列完整性好，如果小環的結構被破壞則無法實現基因組插入；
2.可插入大片段，可以實現上百Kb的BAC片段的插入，而且能夠保證其序列完整性，可以進行復雜的基因功能研究；
3.目的插入效率高，由于通過酶促反應，所以整個反應的過程效率遠遠高于DNA隨機插入效率；
4.目的基因表達穩定，由于細胞插入的拷貝數相對于病毒來說比較穩定，在穩轉株的構建過程中，細胞的表達更加穩定；
5.實驗時間只需要慢病毒系統時間一半，實驗更加安全；
6.可以實現：穩轉之后對目的克隆進行檢測后可以再將目的基因在原克隆移除，輕松實現加減法的對照。
|? ?技術流程圖
|? ?VIRUS-Free? 細胞基因穩轉技術
2Kb以內基因插入（合成法）
插入片段小于2Kb的項目，我們將通過化學合成的辦法獲得質粒，并進行細胞轉導，通過抗藥性的篩選獲得穩轉克隆。
2-20Kb的基因插入（載體法）
插入片段2-8Kb的項目，我們將通過載體構建的辦法來獲得質粒，并進行細胞轉導，通過抗藥性的篩選獲得穩轉克隆。
Step1.?目的序列PCR擴增
Step2.?目的載體的構建獲得表達載體
Step3.?目的細胞的轉導和抗性藥物篩選獲得目的克隆
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BAC片段細胞系穩轉（BAC修飾）
通過Red重組系統對BAC進行遺傳修飾獲得重組BAC，并進行細胞轉導，通過抗藥性的篩選獲得穩轉克隆。
Step1. 目的序列PCR擴增
Step2. 通過Red重組獲得經過遺傳修飾的BAC
Step3. 目的細胞的轉導和抗性藥物篩選獲得目的克隆
