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土壤脲酶（UE)測試盒微量法正式測定前務必取?2-3?個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

UE?能夠水解尿素，產生氨和碳酸。UE?活性與有機物質含量、全氮和速效氮含量呈正相關，?反應了氮素狀況。

測定原理：?

利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產生的?NH₃-N。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96?孔板、研缽、冰、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體?50mL×1?瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1?瓶，臨用前加入?9mL?蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑?4℃ 保存；

試劑二：液體?19mL×1?瓶，4℃保存；

試劑三?A?液：液體×1?支，4℃保存；試劑三?B?液：液體×1?瓶，4℃保存；臨用前將?A?液倒入?B?液中混合，待用；用不完的試劑?4℃保存一周；

試劑四：液體?2mL×1?瓶，4℃保存；

樣本的前處理：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量

（10⁴?個）：提取液體積（mL）為?500~1000：1?的比例（建議?500?萬細菌或細胞加入?1mL?提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率?20％或?200W，超聲?3s，間隔?10s，重復?30?次）；?8000g?4℃離心?10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為?1：5~10?的比例（建議稱取約?0.1g?組織，加入?1mL?提取液），進行冰浴勻漿。8000g?4℃離心?10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱?30min?以上，調節波長至?578nm，蒸餾水調零。

2、酶促反應

混勻，放入?37℃水浴?1h?后，10000g 25℃離心?10min，取上清液。

2、將上清液稀釋?10?倍（取?0.1mL?上清液，加入?0.9mL?蒸餾水）。

3、測氨量（在微量石英比色皿或?96?孔板中加入下列試劑）

充分混勻，室溫放置?20min

混勻，于?578nm?處，蒸餾水調零，讀吸光值?A，計算ΔA=A?測定管-A?對照管。每個測定管設一個對照管。

UE 活力計算

a.?用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為?y?=?0.0915x?+0.0373；x?為標準品濃度（μg/mL），y?為吸光值

A。

1、血清（漿）UE?活力的計算:

單位的定義：每?mL?血清（漿）每分鐘產生?1μg NH₃-N?定義為一個酶活力單位。

UE?活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V?反總÷V?樣÷T=27.32×(ΔA -0.0373)

單位的定義：每天每?g?土樣中產生?1μg NH₃-N?定義為一個酶活力單位。

2、組織、細菌或細胞中?1μg NH₃-N?活力的計算:

（1）?按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每?mg?組織蛋白每分鐘產生?1μg NH₃-N?定義為一個酶活力單位。

UE?活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V?反總÷(V?樣×Cpr)÷T =27.32×(ΔA

-0.0373)?÷Cpr

（2）?按樣本鮮重計算：

單位的定義：每?g?組織每分鐘產生?1μg NH₃-N?定義為一個酶活力單位。

UE?活力（μg/min/?g??鮮重）＝(ΔA-0.0373)?÷0.0915×10×V反總÷(W×?V?樣÷V?樣總)÷T?=27.32×(ΔA

-0.0373)?÷W

（3）?按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每?1?萬個細菌或細胞每分鐘產生?1μg NH₃-N?定義為一個酶活力單位。

UE?活力（μg/min/10⁴?cell）＝(ΔA-0.0373)?÷0.0915×10×V?反總÷(500×V?樣÷V?樣總)?÷T=0.0546×ΔA

10：稀釋倍數；T：反應時間，60min；?V?反總：反應體系總體積：0.3mL；V?樣：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V?樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；

W：樣本質量，?g；500：細菌或細胞總數，500?萬。

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