產品簡介

本品是即用型2×預混合溶液，包含High-Fidelity DNA Polymerase，dNTPs以及優化的緩沖體系。預混液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體，可簡便地進行高特異性的Hot Start PCR。預混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增目的片段的長度可長達13 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。適用于復雜模板的擴增，擴增產物為平末端。

本試劑盒具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點，反應體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進行擴增，簡化了實驗步驟，節省了時間。本產品中含有電泳指示染料，PCR產物可直接進行電泳。另外，該產品還含有特異保護劑，使得預混液反復凍融后仍可維持穩定活性。

產品規格 

組分信息

產品儲存

-25~-15℃保存，有效期1年。

操作注意

1) 為了您的安全和健康，請穿實驗服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防護性措施進行實驗操作。

2) 本產品僅作科研用途！

操作說明

推薦PCR反應體系

表1 PCR反應體系

【注】：

1) *在終濃度1×預混液含有1 U/50 μL的聚合酶、2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs。

2) ** PCR反應體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.4 μM。

3) ***不同模板的推薦使用量（25 μL反應體系）:

推薦PCR反應程序

1) 兩步法程序(優先推薦)

表2 PCR反應程序

2）三步法程序(常規程序)

【注】：

a. *預變性溫度和時間：推薦溫度：98°C，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。

b. **退火溫度和時間：推薦溫度：60°C，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。

c. ***延伸溫度和時間：推薦溫度：72°C。時間：30 sec/kb，復雜模板根據實際情況可延長至60 sec/kb。

3）梯度溫度退火程序(難擴增基因推薦程序)

4）不同擴增程序下的特點