R5421 酵母感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

R5421釀酒酵母菌株為K+/鉀離子缺陷型菌株，在文獻中也稱為 CY162，MATα型，多用于K+/鉀離子轉運蛋白的鑒定試驗中，也可用于K+/鉀離子通道或鈉鉀離子泵的鑒定試驗。 Transformation marker為：ura3，leu2，該菌株可以在含有 100mM KCl的培養基中正常生長，在含有5-10mM KCl的培養基中 生長緩慢，當培養基中KCl濃度低于0.5mM，R5421（CY162）細 胞停止生長。R5421感受態細胞經特殊工藝制作，pGADT7質粒檢 測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA

基因型：MATα ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64

2.使用說明：

1).取一支無菌的1.5ml EP管，依次加入預冷的目的質粒1-3μg,Carrier DNA 10μl(95-100℃ 5min快速冰浴，重復一次)，100μl冰.上融化的R5421感受態細胞，PEG/LiAc 500ul， 輕輕翻轉混勻6-8次;

2).30℃ 水浴30min，每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

3).每支加入20ul的二甲基亞砜; (用于提高轉化效率，可不做)

4).42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉混勻6- 8次;

5).12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1m1的YPD Plus于30℃復蘇1h; (用于提高轉化效率， 可不做)

6).12000rpm瞬時離心棄上清，用100ul 0.9% NaCl 重懸，涂板,30℃培養48 - 96h。

3.注意事項：

1).感受態細胞最好在冰上融化,。

2).PEG溶液在低溫環境下會析出，請于常溫下完全溶解后使用。

*本試劑僅供實驗室研究使用