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神經(jīng)元順向跨多標(biāo)記

神經(jīng)元順向跨多標(biāo)記

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產(chǎn)品名稱: 神經(jīng)元順向跨多標(biāo)記

英文名稱: 神經(jīng)元順向跨多標(biāo)記

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神經(jīng)元順向跨多標(biāo)記
簡(jiǎn)介
大腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)是由數(shù)目龐大,以及形態(tài)、功能各異的神經(jīng)元,通過突觸連接構(gòu)成的復(fù)雜結(jié)構(gòu),是大腦行使認(rèn)知、情感、記憶及想象等活動(dòng)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。提示大腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的結(jié)構(gòu)是理解大腦處理信息的機(jī)制的前提,傳統(tǒng)的示蹤方法促進(jìn)了人們對(duì)大腦神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí),但難以用于研究多個(gè)腦區(qū)、多種類型神經(jīng)元通過突觸連接形成復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò),這類神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)才是大腦處理特定信息所依賴的環(huán)路。
解析大腦不同腦區(qū)、不同類型神經(jīng)元之間的神經(jīng)環(huán)路連接是神經(jīng)科學(xué)研究的重要任務(wù)之一,繪制大腦連接體圖對(duì)于理解大腦如何工作是至關(guān)重要的,病毒工具是目前最為有效、應(yīng)用最廣的神經(jīng)環(huán)路示蹤工具。神經(jīng)回路是神經(jīng)功能的基本單位,是連接大尺度結(jié)構(gòu)/功能和小尺度分子/信號(hào)通路的橋梁有效地繪制神經(jīng)回路需要逆行和順行示蹤病毒同時(shí)傳輸多級(jí)或單級(jí)突觸。目前,順向跨多級(jí)的病毒載體工具有HSVVSV

1. 神經(jīng)元順向跨多級(jí)標(biāo)記示意圖

病毒策略

  1. HSV-1-129
H129是一個(gè)HSV-1型病毒的臨床分離株。經(jīng)過多年在各種動(dòng)物模型的活體中測(cè)試,發(fā)現(xiàn)這個(gè)病毒在外周神經(jīng)系統(tǒng)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)都具有嚴(yán)格順向跨突觸的特性。病毒感染神經(jīng)細(xì)胞后,在胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)目的基因,子代病毒經(jīng)軸突運(yùn)輸?shù)酵挥|前,跨突觸進(jìn)入下游神經(jīng)元,開始新一輪的復(fù)制及跨突觸傳播等過程。經(jīng)過改造的病毒,裝入熒光蛋白以后可以實(shí)現(xiàn)高效、穩(wěn)定的順行跨突觸標(biāo)記神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)適合于神經(jīng)輸出環(huán)路的順行示蹤研究
rH129-EGFP注射到小鼠腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA,觀察到rH129-EGFP順行跨多級(jí)到海馬(Hippocampus)、中縫背核(DR)、杏仁核背內(nèi)側(cè)核前段(BMA)、腳內(nèi)核(EP)、下丘腦(Hypothalamus)和鼻外皮層(Ect)。

2.?利用rH129-EGFP標(biāo)記小鼠腹側(cè)被蓋區(qū)(VTA)的輸出神經(jīng)環(huán)路BrainVTA

案列展示
實(shí)例一R-NG的順向跨多級(jí)病毒示蹤
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:VGlut2-ires-Cre (Slc17a6tm2(cre)Lowl/J)?mice
使用的病毒:H129DTK-TT
實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果:H129DTK-TT注射到VGlut2-ires-Cre鼠的右側(cè)結(jié)神經(jīng)節(jié)(R-NG),追蹤到病毒順向跨多級(jí)到APDMVAPPVHPBNdlSNcVTA

3. 迷走神經(jīng)中樞通路的標(biāo)記(Han W, et al., Cell, 2018
  1. VSV
VSV病毒具有特異順向跨突觸的特性。當(dāng)病毒定位注射到實(shí)驗(yàn)區(qū)域,病毒感染神經(jīng)細(xì)胞后在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并表達(dá)攜帶的熒光蛋白基因,子代病毒產(chǎn)生后經(jīng)軸突運(yùn)輸?shù)酵挥|前,跨突觸進(jìn)入下游神經(jīng)元,并開始新一輪的復(fù)制、包裝及跨突觸傳播等過程。用于順向跨突觸示蹤的VSV工具病毒,在大/小鼠動(dòng)物模型中的神經(jīng)回路示蹤研究中廣泛使用。它也能感染多種動(dòng)物模型,包括魚類、禽類,及非人靈長(zhǎng)類等。其特點(diǎn)是復(fù)制及跨突觸速度快,外源基因表達(dá)量超高,可獲得神經(jīng)元精細(xì)形態(tài)。
如將VSV-EGFP注射到C57小鼠Spleen區(qū)域,在大腦中樞ARCDMHPIRI區(qū)域檢測(cè)到熒光信號(hào),表明VSV-EGFP順行跨多級(jí)到了這三個(gè)核團(tuán)

4.?VSV-EGFP注射到小鼠Spleen區(qū)域的輸出神經(jīng)環(huán)路(BrainVTA

案列展示
實(shí)例一OB的順向跨多級(jí)病毒示蹤
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:C57BL/6 mice
使用的病毒:VSV-mCherry
實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果VSV-mCherry注射到小鼠嗅球(OB)后,追蹤結(jié)果顯示,VSV感染72小時(shí)后,嗅相關(guān)腦區(qū)PIRILEntLC觀察到信號(hào);VSV感染96小時(shí)后,更多的腦區(qū)如AONPIRILEntHMScLDTLC都觀察到信號(hào)。

5. 嗅球(OB)對(duì)基底前腦(BF的輸入網(wǎng)絡(luò)(Zheng Y, et al., Front Neural Circuitsl, 2018

可用于研究的神經(jīng)科學(xué)問題:
  1. 研究大腦特定區(qū)域的全腦范圍多級(jí)輸入網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu);
從低級(jí)腦區(qū)向特定高級(jí)腦區(qū)的信息輸入的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)
從高級(jí)腦區(qū)向特定低級(jí)腦區(qū)反饋信息輸入的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)
  1. 大腦內(nèi)不同功能亞區(qū)之間結(jié)構(gòu)連接的檢測(cè)及驗(yàn)證;
  2. 追蹤外周器官與中樞神經(jīng)系統(tǒng)間的聯(lián)系通路;
  3. 神經(jīng)發(fā)育過程中的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)變化;
  4. 疾病模型的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)變異。

產(chǎn)品列表
產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱攜帶熒光蛋白功能
H01001rH129-EGFPEGFP順行跨多級(jí),綠色標(biāo)記
H01002rH129-tdTomatotdTomato順行跨多級(jí),色標(biāo)記
V01001VSV-EGFPEGFP順行跨多級(jí),綠色標(biāo)記
V01002VSV-mCherrymCherry順行跨多級(jí),色標(biāo)記
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參考文獻(xiàn)
  1. Zeng WB,?Jiang HF,?Gang YD,?Song YG,?Shen ZZ,?Yang H,?Dong X,?Tian YL,?Ni RJ,?Liu Y,?Tang N,?Li X,?Jiang X,?Gao D,?Androulakis M,?He XB,?Xia HM,?Ming YZ,?Lu Y,?Zhou JN,?Zhang C,?Xia XS,?Shu Y,?Zeng SQ,?TUNEology 波長(zhǎng)可調(diào)檢測(cè)卡盒-->