Stable感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌Stable菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，NEB公司開發的高轉化效率菌株，是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株。

基因型：F' proA+B+ lacIq ∆(lacZ)M15 zzf::Tn10 (TetR) ∆(ara-leu) 7697 araD139 fhuA ∆lacX74 galK16 galE15e14- Φ80dlacZ∆M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1 ∆(mrr-hsdRMS -mcrBC)

特點：1.Stable菌株是NEB公司開發的高轉化效率菌株，是逆轉錄病毒/慢病毒載體系統推薦使用的菌株，具有與Stbl2，Stbl3完全不同的基因型，但是表現出比Stbl2，Stbl3更優異的性能，特別適合慢病毒或具有末端重復序列DN**段的克隆。2. 含有recA1 rel A1突變，可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率。3.含有核酸酶endA1突變，避免提取質粒過程中核酸酶的污染，提高了提取病毒質粒的產量和質量。4.含有lacZΔM15，可用于藍、白斑篩選。具四環素和鏈霉素抗性。pUC19檢測，轉化效率可達108 cfu/μl DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養， 37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．對不穩定DN**段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在30℃培養，以減少發生錯誤重組的概率。

2．制備高純度病毒質粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質粒，菌液不可低溫保存后使用。

3．對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存，盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。

4．感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率?；烊肽康腄NA時應輕柔操作。

5．轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

*本試劑僅供實驗室研究使用