貨號：CPK0010-200T

BrdU 作為一種胸腺嘧啶核苷的類似物（其化學結構特點是胸腺嘧啶的堿基嘧啶環上與5位C 原子連接的甲基被溴代替），像胸腺嘧啶核苷一樣可摻入到細胞合成的DNA 中。當細胞處于DNA 合成期（S 期）而同時又有BrdU 存在時, 就會有BrdU 摻入新合成的DNA 中，只要細胞不消亡，這種BrdU 就在胞核的DNA 中長期存留。

本試劑盒中的小鼠抗BrdU 單克隆抗體可以與摻入進DNA 的結合，再加入HRP 標記的羊抗小鼠，最后通過TMB 底物液顯色，其顯色值高低與BrdU 摻入細胞量成正比。

試劑盒優點：

與其他細胞增殖檢測方法相比較，本試劑盒靈敏度高、沒有放射性污染，其可以檢測的最低檢測限度為50-100 個細胞，并且只檢測新增殖細胞。

主要用途：

細胞因子、生長因子、分裂素和營養因子刺激后，監測和定量細胞增殖；

分析藥物的細胞毒性個，如抗癌藥物等；

分析不同成分對細胞增殖的抑制或者刺激作用

實驗樣品類型：

貼壁或懸浮細胞

試劑盒組分：

試劑盒保存：短期存放可放置2-8℃，長期存放請按說明分別存放。

使用之前最好離心，將液體全部歸集到管底，然后再開蓋；

以下試劑根據所需要的使用量臨用前配置，不建議長期儲存；

10 x BrdU 溶液：使用前將BrdU 母液（100 x）用細胞培養液1:10 稀釋成10 x BrdU 溶液；

BrdU 檢測抗體：使用前將BrdU 檢測抗體（100 x）用抗體稀釋液1:100 稀釋成工作液；

HRP 標記羊抗小鼠：使用前按需將HRP 標記羊抗小鼠（100 x）用抗體稀釋液1:100 稀釋；

洗滌緩沖液：使用前按需將洗滌緩沖液（10 x）用dH2O 作1：10 稀釋.

試劑盒使用步驟：

1. 細胞培養：

細胞鋪板培養，每孔2500-10000 個，在37℃ 5% CO2 孵箱中培養，根據細胞類型培養相應時間（細胞密度至50-60%左右最好），在合適的時候加入加入待測試的實驗組分，培養到合適的時間。

2. 標記BrdU：

將10 x BrdU（5-溴-2′-脫氧尿苷）加入培養細胞中，終濃度為1X，培養標記1-48h(根據實驗試劑需求來確定最佳標記時間，同時需要設置不加入BrdU作為空白對照)。

3. 固定與檢測：

1）丟棄細胞培養上清，每孔加入100ul 細胞固定液,室溫固定30 分鐘（根據細胞特點確定最佳固定時間）；

2）吸干孔里溶液，每孔加入100ul 細胞變性液,室溫變性5-15分鐘（根據細胞特點確定最佳固定時間）；

3）吸干孔里溶液，每孔加入300ul 洗滌液，洗三次；

4）吸干孔里溶液，每孔加入100ul BrdU 檢測抗體，37℃輕微震蕩反應 1小時；

5）吸干孔里溶液，每孔加入300ul 洗滌液，洗三次；

6）加入稀釋好的HRP 標記羊抗小鼠，每孔100ul，37℃反應 1小時；

7）吸干孔內溶液，每孔加入300ul 洗滌液洗三次；

8）每孔加入100ul TMB 底物液，室溫反應5-15 分鐘；

9）每孔加入100ul 底物終止液，酶標儀上讀取OD450值。

注意事項：

1）若是懸浮細胞，必須謹慎操作；細胞固定的時候必須小心吸取細胞上清，必要的時候適當離心；

2）在多次洗滌過程中必須小心，不可將細胞洗掉；

3）固定或變性不徹底都將導致本實驗失敗；

4）加入底物之后顯色必須謹慎，不要顯色過度以至于背景太高；加入終止液之后需要立即讀數。

重要聲明：

1） 因細胞種類繁多和實驗體系不同，細胞脫落不在本試劑盒質量投訴范圍中；

2） 數據處理方法不在本產品投訴范圍中；

3） *本試劑僅用于實驗室科研使用。