快速過濾法無內毒素中量質粒提取試劑盒（25preps)-核酸純化-試劑-生物在線
Biomiga（中國）
快速過濾法無內毒素中量質粒提取試劑盒（25preps)

快速過濾法無內毒素中量質粒提取試劑盒（25preps)

商家詢價

產品名稱： 快速過濾法無內毒素中量質粒提取試劑盒（25preps)

英文名稱： EndoFree plasmid ezFlow ezFilter midi kit

產品編號： PD1422-02

產品價格： 0

產品產地： 美國圣地亞哥

品牌商標： Biomiga

更新時間： null

使用范圍： null

Biomiga（中國）
  • 聯系人 :
  • 地址 : 上海市閔行區吳河路328號A棟2樓
  • 郵編 : 201109
  • 所在區域 : 上海
  • 電話 : 400-826-1968 點擊查看
  • 傳真 : 點擊查看
  • 郵箱 : tech@biomiga.com.cn

試劑盒組分：
?
Catalog #
PD1422-02
Preps
25
EzBindTM Columns
25
Filter syringe (20 mL)
25
Buffer A1
70 mL
Buffer B1
70 mL
Buffer N3
100 mL
Buffer KB
135 mL
Buffer RET
135 mL
Endofree Elution Buffer
40 mL
RNase A (20 mg/mL)
7 mg(350 μL)
User Manual
1
?
保存條件：
?
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
?
注意事項：
  1. 質粒拷貝數：純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100%乙醇，相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和EndoFree Elution Buffer.
  2. 轉化菌: 若為-70℃甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 柱結合能力：250 μg
  4. 對富含內源核酸酶的宿主菌（endA＋）如HB101, JM101, TG1等，需去核酸酶，請使用產品PD1712。
操作簡明步驟：
  1. 取50 μL新鮮的菌液接種到15-50 mL (勿超過 50 mL)的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
  2. 加入2.5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
  3. 加入 2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  4. 加入1 mL Buffer N3, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
  5. 將裂解液轉移至過濾器中，放在一個15 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來，對準15 mL的管向下壓，使裂解液盡可能多的通過，有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注：靜至10 分鐘時RNase A將工作，排除RNA污染。若離心十分鐘后再用過濾器過濾更有利于去除蛋白。
  6. 向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),及3 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混勻，需馬上離心過DNA柱。
  7. 立即轉移6 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下5,000 x g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
  8. 可選：向離心柱中加入5 mL Buffer KB，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
  9. 向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
  10. 將離心柱放回高速離心機中，室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
  11. 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1 mL的Endofree Elution Buffer, 室溫放置1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘，以洗脫質粒DNA。將15 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。