Rossetta-gami(DE3)pLysS感受態細胞

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1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。同時集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的優點，有助于含二硫鍵蛋白的高效表達，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平。

基因型：Δ(ara-?‐leu)7697?ΔlacX74?ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, StrR, TetR)

特點：1．Rosetta-?‐gami系列菌株來源于Origami系列宿主菌，該系列菌株的優點除了含有Origami菌株原有的TrxB和Gor基因突變提高含二硫鍵正確折疊，有助于含二硫鍵蛋白的高效表達，同時含有Rosetta系列菌株中含有的真核細胞稀有密碼子。2．含有pRARE質粒，能夠提供AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，和GGA六個真核細胞中的稀有密碼子tRNA，能夠有效提升真核細胞蛋白的表達水平。3．含有pLySs質粒，能夠產生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基礎表達水平，的起始復制位點是p15 Origin，這使得該質粒能夠和pUC-?‐及pBR322-?‐衍生的質?；ハ喙泊妗?/span>4．?rpsL突變使得該菌株具有鏈霉素抗性DE3是溶源性的?λDE3，所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體，及其他T7啟動子系列載體。被建議使用于含有Bla標記的氨芐抗性表達質粒，具有具有氯霉素，卡那，鏈霉素和四環素抗性，當使用pCDF系列載體時，還需要使用壯觀霉素(Spectinomycin)進行篩選。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2．整個動作要輕柔。

3．質粒質量和濃度等的差異會使轉化效率有所下降。

*本試劑僅供實驗室研究使用