GsmartI Taq DNA Polymerase
產品名稱： GsmartI Taq DNA Polymerase
英文名稱： GsmartI Taq DNA Polymerase
產品編號： GWP101S
產品價格： 0
產品產地： 中國
品牌商標： Genewiz
更新時間： null
使用范圍： null
蘇州金唯智生物科技有限公司
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產品名稱：GsmartI Taq DNA Polymerase
貨號：GWP101
濃度：5U/ul
保質期：24個月
保存條件：-20℃
產品內容：
產品組成 | GWP101S | GWP101M | GWP101L |
500u | 1000u | 2500u | |
GsmartI Taq DNAPolymerase | 100 ul | 200 ul | 500ul |
| 10X Taq Buffer | 1ml | 2ml | 5ml |
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產品簡介：
GsmartI Taq DNAPolymerase是通過將編碼Thermus aquaticus DNA polymerase基因的質粒轉化到大腸桿菌，經誘導表達后分離純化獲得，其分子量約為94KD。該酶有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切酶活性，但無3’-5’外切酶活性。經檢測無外源核酸酶的污染和宿主DNA的殘留，擴增效率高，穩定性好，適合用于常規的PCR擴增和菌落PCR。
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主要應用：
- PCR快速擴增
- 菌落PCR
- 擴增的DN**段可用于TA克隆
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擴增能力：
- 延伸速度：4-6kb/min
- 簡單模板，如以λDNA為模板，30秒的延伸時間可以有效擴增3kb片段，4分鐘的延伸時間可以有效擴增不超過8kb片段
- 復雜模板，如以人基因組為模板，可以有效擴增不超過3kb片段。
- 擴增產物3’端突出一個“A”堿基，可直接用于T載體克隆
活性單位定義：
75℃ 30min內催化15nmol脫氧核糖核酸生成非酸解物質的酶量定義為一個活性單位，即1U
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使用指導：
1. 推薦反應體系：
成分 | 常規PCR | 菌落PCR | |
10× Taq Buffer | 5 ul | 10 ul | 3 ul |
dNTP (10mM each) | 0.5ul | 1 ul | 0.3 ul |
Forward primer?（20 uM） | 0.5 ul | 1ul | 0.3 ul |
Reverse primer?（20 uM） | 0.5 ul | 1ul | 0.3 ul |
模板DNA?? | X ul | X ul | 0.5-3ul |
GsmartI Taq DNA Polymerase | 0.5 ul | 1ul | 0.3ul |
滅菌ddH2O | 補水至50ul | 補水至100ul???? | 補水至30ul |
* 推薦的引物終濃度為0.2uM，但可以根據需要在0.1-0.5uM范圍內變化。
*常規PCR模板為質粒、基因組等；菌落PCR模板為菌液，37℃搖床培養1-3h的菌液，模板量以3ul為宜，過夜培養菌液通常0.5ul即能滿足PCR需求，過多菌液可能會導致PCR產物電泳掛孔。
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2. 將反應管上下顛倒混勻數次，盡量避免產生氣泡，最后使用微型離心機離心
3. PCR反應程序：
反應程序 | Temperature, °C | Time | cycles |
預變性 | 95 | 4 min | 1 |
變性 | 94 | 30 s | 25-35/* |
退火 | X℃ | 30 s | |
延伸 | 72 | Y | |
終延伸 | 72 | 5-10 min | 1 |
保存 | 4 | Hold | Hold |
備注：
建議以引物的Tm-5℃作為退火溫度；
菌落PCR通常25個循環即可。
延伸時間Y可以參考下表確定：
Target | Y |
0-3k | 6kb/min |
3-8k | 2kb/min |
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注意事項：
- Mg2+的終濃度一般推薦為2mM，可以滿足常規的PCR擴增要求；對于某些PCR，為獲得較好的擴增效果， Mg2+濃度可以在2-4mM范圍內調整.
- 50ul體系中，2.5U的酶可以滿足絕大多數PCR擴增需求；對于某些PCR如有特殊需要，可以適當增加酶的用量，但不能超過5U.
可能遇到的問題及解決辦法：
1)??? 無擴增產物或擴增效率低
a) ?? 重復一次，排除操作誤差
b)??? 檢查引物是否因儲存不當降解
c) ?? 模板是否儲存時間太長或是反復凍融導致降解；模板GC含量是否過高，過高可在反應體系中添加DMSO或甜菜堿等增強劑
d)??? 所用的DNA聚合酶是否失活，建議使用一支新的酶重新擴增
e) ?? 延長延伸時間
f) ? ? 增加擴增循環數
g)??? 優化退火溫度
2)??? 出現非特異性擴增或smear帶：
a) ?? 引物特異性差，引物與模板有非特異性結合，必要時重新設計引物
b) ?? 模板被污染或降解：重新制備模板
c) ? ? 減少酶用量
d) ? ? 縮短延伸時間
e) ? ? 減少循環數
f) ? ?? 降低引物濃度