SURE感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌SURE 感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。菌株體內重組酶系統整條通路被破壞，提高外源甲基化DNA的克隆效率，增強外源DNA的穩定性；解決真核生物DNA存在較多“十字型”、 “Z字型”等二級或三級結構導致的克隆問題，可進行藍白斑篩選。

基因型：E. coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)]

特點：1．此菌株體內重組酶系統整條通路被破壞，并且 (McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-)這些限制性突變的存在賦予此菌株無法對外源DNA進行標記、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率。2．同時具有核酸酶 (endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變，增強了外源DNA的穩定性。3．存在于F′因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選。具卡那，四環素抗性。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108 cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養， 37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．在冰上融化?；烊胭|粒或連接產物時應輕柔操作。

2．轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

*本試劑僅供實驗室研究使用