無內毒素小量質粒提取試劑盒（50preps)-核酸純化-試劑-生物在線
Biomiga（中國）
無內毒素小量質粒提取試劑盒（50preps)

無內毒素小量質粒提取試劑盒（50preps)

商家詢價

產品名稱： 無內毒素小量質粒提取試劑盒（50preps)

英文名稱： EndoFree plasmid ezFlow mini kit

產品編號： PD1220-01

產品價格： 0

產品產地： 美國圣地亞哥

品牌商標： Biomiga

更新時間： null

使用范圍： null

Biomiga（中國）
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試劑盒組成：
Catalog Number
PD1220-01
Preps
50
ezBind Columns
50
Buffer A1
15 mL
Buffer B1
15 mL
Buffer N3
4 mL
Buffer KB
30 mL
Buffer RET
30 mL
DNA Wash Buffer*
15 mL
Endofree Elution Buffer
10 mL
RNase A (20 mg/mL)
1.5 mg（75 μL)
User Manual
1
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保存條件：
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RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項：
  1. 質?？截悢? 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
  2. 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
  3. 切勿直接取凍存的菌進行培養。
操作簡明步驟：
  1. 接種新鮮的單個菌落到3-5 mL的LB培養基 (含適量抗生素)，37oC震蕩培養14-16小時。
  2. 室溫下10,000 x g離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
  3. 加入250 μL Buffer A1 (確保已加入RNase A)，用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
  4. 加入 250 μL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  5. 加入60 μL Buffer N3, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
  6. 將離心管轉至高速離心機，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中仍有白色沉淀，可再次離心）。
  7. 定量吸取離心后的上清液至新的1.5 mL管中，加入1倍體積的Buffer RET, (如500 μL裂解液加入到500 μL的上清液)及250 μL的100% ethonal，用手用力甩3次以混勻。
  8. 將溶液700 μL轉移至帶有收集管的DNA柱中，室溫下13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。再重復此步驟至全部溶液轉移至DNA柱中。
  9. 可選: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
  10. 向離心柱中加入500 μL DNA Wash Buffer(確保已加入無水乙醇)，室溫下，13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“10”。
  11. 將離心柱放回高速離心機中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
  12. 將離心柱轉至一個新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50~100 μL(體積>50 μL)的EndoFree Elution Buffer，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，收集洗脫液到同一個離心管中。
操作流程：