Top10F 感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌Top10F 感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。來源于Top10，適合于trc,tac,lac啟動子通過IPTG誘導表達，可用于構建克隆、藍白斑篩選、 一些表達毒性蛋白質粒的擴繁。

基因型：F′{lacIq Tn10 (Tetr)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1araD139 ∆(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

特點：1.此菌株F`因子攜帶 lacIq 抑制子，可抑制 trc，tac，lac 等啟動子下游基因的表達，從而可以用于一些表達毒

性蛋白質粒的擴繁。2. recA1和endA1的突變,有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。3.存在lacIqZΔM15基因使此菌株可以進行藍白斑篩選。具四環素（Tetr）抗性。pUC19質粒檢測，轉化效率可達108 cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，靜置冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞最好在冰中緩慢融化，8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2．混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

*本試劑僅供實驗室研究使用