桿狀病毒-昆蟲蛋白表達及純化服務
產品名稱： 桿狀病毒-昆蟲蛋白表達及純化服務
英文名稱： Baculovirus - insect protein expression and purification services
產品編號： GM-PE-01
產品價格： 0
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品牌商標： null
更新時間： null
使用范圍： null
- 聯系人 : 吳經理
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- 所在區域 : 上海
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目前常用的桿狀病毒表達載體有AcMNPV和BmNPV兩種，我們選用的家蠶桿狀病毒表達系統（BmNPV）是基于家蠶體內系統非常適合大規模制備外源蛋白，并且成本較低、方便、高效，而且翻譯后加工也與天然蛋白極其相似。我們結合桿狀病毒的轉染與表達特性，以家蠶幼蟲和蛹為宿主大量表達外源蛋白，為您提供快速，滿意的蛋白表達服務。
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服務內容
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服務步驟 |
主要內容 |
交付內容 |
交付時間 |
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目的基因全基因合成 |
1. 從GenBank中尋找目的蛋白的cDNA序列。 2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子及mRNA二級結構的優化。 3. 合成設計好的基因序列。 |
目的基因（連接在T載體或其它常規克隆載體上）及測序報告。 |
2周 |
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目的基因亞克隆到pFastBac供體質粒 |
1. 培養并抽提含有目的基因的載體質粒。 2. 將目的基因亞克隆到pFastBac供體載體上。 3. 測序驗證構建質粒的準確性。 4. 通過中抽獲得重組的質粒DNA。 |
正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。 |
2-3周 |
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制備重組桿狀病毒Bacmid DNA |
1. 將重組的pFastBac供體質粒轉化到大腸桿菌DH10Bac感受態菌株中。 2. 通過抗生素平板篩選出含有重組Bacmid的菌株。 3. 抽提質粒獲得重組的桿狀病毒Bacmid DNA。 |
重組桿狀病毒Bacmid DNA，含重組質粒的DH10Bac菌株 |
2周 |
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轉染昆蟲細胞Sf-9 |
1. 利用轉染試劑將重組Bacmid質粒轉入昆蟲細胞Sf-9。 2. 收集成熟的重組桿狀病毒并檢測病毒的滴度。3. 通過多次感染提高病毒的滴度，并擴增病毒數量。 4. 通過SDS-PAGE和Western-blot檢測目的蛋白表達情況。 |
高滴度重組桿狀病毒，病毒滴度及蛋白表達檢測結果（如果轉染不成功，則不收取費用。如果沒有檢測到目的蛋白表達，則只收取50%實驗費用）。 |
3周 |
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目的蛋白表達及純化 |
1. 培養500ml昆蟲細胞至對數期，然后加入適量病毒感染細胞并表達目的蛋白。 2. 收集含有目的蛋白的部分（細胞或培養上清）。 3. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。 4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。 5. 通過Western-blot驗證目的蛋白正確性。 6. 可提供表達細胞株：Sf-9，Sf-9 Mimic，High Five。 |
純化好的目的蛋白0.1~2mg及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?SPAN lang=EN-US>Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度可達80%以上。 |
2-3周 |
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目的蛋白的再加工及詳細檢測 |
1. 內毒素去除，除菌，凍干等進一步加工。 2. 通過HPLC，質譜等方法詳細檢測目的蛋白的質量。 |
加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。 |
2-3周 |
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大規模制備 |
按照小試工藝放大生產規模，制備客戶需要的合格蛋白產品。 |
合格的目的蛋白及服務報告。 |
協商 |
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