產品優勢

1、酶轉化 Zuì大限度降低 DNA 損壞，超低 DNA 起始量要求，低至 10ng；

2、卓越的比對率，GC 均一性；

3、高靈敏度，分辨率可達到單個堿基；

4、相比亞硫酸氫鹽方法檢 Cè  可多檢  Cè 15% 的甲基化位點；

5、靈活適用不同靶向區域。

目錄化產品

人（hg38）的 134Mb 設計長度（覆蓋約 400 萬 CpG 位點），基于新的 UCSC, Ensembl, ENCODE 等新的數據庫，關注那些已知甲基化可影響基因調節的區域：57% CpG open seas (interCGI), 21% CpG island shores, 15% CpG islands, 8% CpG island shelves。

▲圖。EM-seq 轉化涉及一系列酶反應，以識別未甲基化胞嘧啶。

在 Dì 一次反應期 間，10-11 易位雙加氧酶 2(TET2) 將甲基 化胞嘧啶（5mC 和 5hmC）轉化為 5 - 羧基 胞嘧啶（5caC) 以及氧化增強劑葡糖苷 酸 5hmC(5ghmC)。這些反應保護 5mC 和 5hmC 免受下游脫氨作用。然后，在 APOBEC 將胞嘧啶脫氨至尿嘧啶之前， 使 DNA 變性。隨后的聚合酶鏈式反應 (PCR) 擴增將修飾的 5mC 或 5hmC 轉化 為胞嘧啶，并將尿嘧啶轉化為胸腺嘧啶。PCR 后，核酸序列與重亞硫酸鹽轉化的 序列一致，使得 EM-seq 與現有分析流程 （如 Bismark 和 bwa-meth）相兼容。

酶法的高效轉化

在 EM-seq 和 BS-seq 中，酶和亞硫酸氫鹽都是將未甲基化的胞嘧啶轉化為胸腺嘧啶，且轉化效率接近。選擇 CpG 甲基化的 pUC19 DNA 和未甲基化的 Lambda DNA 這種已知甲基化 DNA 作為質控對象，結果顯示，兩種文庫轉換方法的轉化率均達到 99.5%，以胞嘧啶在非 CpG 位點轉化為胸腺嘧啶的百分比來測量。

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