免疫組化

實驗原理

免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑?(熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學。

實驗方法

組織石蠟制作

（1）取材后，用PBS清洗，4%多聚甲醛固定。

（2）脫水：將組織浸泡在75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇I、95%乙醇II、100%乙醇I和100%乙醇II中，各10min。

（3）透明：將脫水后的組織分別浸泡在?1/2二甲苯、二甲苯I和二甲苯II中10min。

（4）透蠟：將透明處理過的組織浸泡于融化的石蠟中3h。

（5）包埋。

（6）切片：用切片機將石蠟塊中的組織切成5um厚的薄片，并平鋪于防脫玻片上。

（7）烤片：將切片放置于55℃烤片機上，使組織片緊貼于防脫玻片上。

石蠟切片脫蠟復水

（1）脫蠟：將石蠟切片分別浸泡于二甲苯I、二甲苯II和1/2二甲苯中，各10min。

（2）復水：將脫蠟后的石蠟切片浸泡于100%乙醇I、100%乙醇II、95%乙醇I、95%乙醇II、85%乙醇、75%乙醇中，各5min。

（3）雙蒸水清洗3次，每次2min。

（4）PBS漂洗，3×2min；

抗原熱修復

石蠟切片微波爐抗原修復操作方法：將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中，置微波爐內加熱使容器內液體溫度保持在92℃-98℃之間并持續10-15分鐘。取出容器，室溫冷卻10-20分鐘。PBS清洗，下接免疫組化染色步驟。

免疫組化

（1）在切片組織上滴加0.5%?TritonX-100室溫打孔20min，PBS浸洗切片3次，每次3min。

（2）3%H2O2處理（室溫）15min，PBS浸洗切片3次，每次3min。

（3）山羊血清室溫封閉60min。

（4）取出甩干封閉液（不漂洗）；一抗孵育4℃?過夜。

（5）PBS清洗標本?3次?各?5 min。

（6）二抗工作液孵育37℃ 30 min。

（7）PBS清洗標本?3次?各?5 min。

（8）DAB顯色（避光，鏡下觀察至棕色?）1-?10min。

（9）蒸餾水洗?2次?5 min。

（10）蘇木素復染?5min。

（11）自來水洗返藍。

（12）梯度酒精脫水75，85，95，100%各3min。

（13）二甲苯透明2次3min。

（14）中性樹膠封片。

威斯騰生物服務流程

威斯騰生物服務項目