小鼠 IgM 單克隆抗體腹水純化試劑盒

一、方法簡介

本試劑盒基于不同蛋白在特定沉淀體系中的溶解度差異，結(jié)合分步沉淀、復(fù)溶、透析及終處理流程，對小鼠 IgM 腹水中的目標(biāo)抗體進(jìn)行富集與純化。經(jīng)條件優(yōu)化后，該流程兼顧了抗體活性保持、操作重復(fù)性與樣品回收效率，適合常規(guī)實驗室開展 IgM 腹水純化。

二、產(chǎn)品特點

• 流程清晰，常規(guī)離心條件下即可完成主要純化步驟。

• 針對 IgM 腹水樣本設(shè)計，便于分步去除雜蛋白與脂類成分。

• 在規(guī)范操作前提下，所得抗體純度通?？蛇_(dá)到 90% 以上。

• 體系較為溫和，有利于保留抗體天然活性，便于后續(xù)實驗應(yīng)用。

三、試劑盒組份

四、操作流程

1. 樣品與試劑復(fù)溫：將試劑盒從 4°C 取出，在室溫放置約 30 分鐘。可同時取出腹水樣品，在避光條件下于室溫放置約 15 分鐘；樣品如已凍結(jié)，可在流動自來水下邊輕搖邊快速融解。

2. 首次澄清離心：將融解后的單克隆抗體腹水以 8000-12000 rpm、室溫離心 10 分鐘。

3. 加入純化液 A：棄去最上層浮沫及油脂，將上清轉(zhuǎn)移至潔凈離心管或容器中。按每 1 mL 腹水加入 1 mL 純化液 A 的比例處理，輕輕倒轉(zhuǎn)混勻后，室溫避光放置 30 分鐘。

4. 沉淀復(fù)溶并加入純化液 C：以 8000 rpm、室溫離心 10-20 分鐘。收集沉淀，并用純化液 B 將其溶解至原始腹水體積的 1/2。隨后按當(dāng)前體積每 1 mL 加入 1 mL 純化液 C，倒轉(zhuǎn)混勻后室溫避光放置 10 分鐘。

5. 收集上清并加入純化液 D：再以 8000 rpm、室溫離心 10-20 分鐘，棄沉淀、保留上清。按每 1 mL 上清加入 1 mL 純化液 D，倒轉(zhuǎn)混勻后室溫避光放置 20 分鐘。

6. 沉淀復(fù)溶與透析：以 8000 rpm、室溫離心 10-20 分鐘后收集沉淀，用純化液 B 緩慢復(fù)溶，終體積控制為原始腹水體積的 1/3。透析袋先用純水浸泡 5 分鐘，再輕捏數(shù)次并用純水沖洗干凈后裝樣封口。透析液可直接用純水配制至 8 L；若先配成 400 mL 濃縮液，使用時按 20× 稀釋。按抗體體積 : 透析液體積 = 1 : 100 的比例，于 4°C 透析過夜。透析完成后取回抗體。

7. 加入純化液 E：按透析后抗體體積 : 純化液 E 體積 = 9 : 1 的比例加入純化液 E，混勻后靜置 5 分鐘，再以 8000 rpm、室溫離心 10 分鐘。棄去沉淀，保留上清，即為純化后的抗體。

8. 緩沖液置換與終處理：將純化抗體換入后續(xù)實驗所需緩沖液。建議按抗體體積 : 透析液體積不低于 1 : 50，于 4°C 透析，并在過程中換液 3 次；總透析時間不宜超過 24 小時。隨后以 8000 rpm、室溫離心 10 分鐘，取上清測定蛋白濃度，并調(diào)整至約 5 mg/mL。最后加入 1/100000 體積的 NaN3 作為防腐劑，完成除菌過濾后于 -20°C 保存?zhèn)溆谩?/p>

五、儲存條件

試劑盒建議避光保存于 4°C（或 2-8°C）。在未開啟條件下，保質(zhì)期為 1 年。

六、注意事項

• 嚴(yán)重溶血或已明顯腐敗的腹水樣本不建議用于本流程。

• 離心操作溫度不宜高于 37°C。

• 各步加樣與量取請盡量準(zhǔn)確，否則可能影響最終純度和回收效果。

• 若透析過程中不進(jìn)行攪動，每次靜置透析時間建議不少于 4 小時。

• 如認(rèn)為常規(guī)透析效率偏低，可根據(jù)實驗條件改用超濾管進(jìn)行緩沖液置換。

• 由于部分單抗制備過程存在人工篩選與培養(yǎng)因素，少數(shù) IgM 細(xì)胞株所得抗體的結(jié)構(gòu)或理化性質(zhì)可能出現(xiàn)差異。若確認(rèn)操作無誤但純化效果仍不理想，可嘗試改用其他更適配的純化方案。

*本試劑僅供實驗室研究使用