HT-Blot Western Blot孵育器

（本說明書適合WB-MS-20/WB-MS-10系列所有產品）

免疫印跡實驗（Western Blot）是目前實驗室進行免疫檢測最常用的實驗方法之一。與ELISA實驗方法相比，Western Blot實驗流程更繁瑣，工作量更大，如果對多個樣品同時進行檢測，通常是將轉印之后的膜一條條剪下，分別放入對應的一抗小孵育盒子或者雜交袋；漂洗之后再分別加入對應的二抗分別孵育；實驗過程中需要在每張膜條上做標記，其工作量相當大，一旦標記錯誤或記錄錯誤都會造成很大麻煩。

本孵育器采用物理分隔的方式將膜分格成小室，對應待孵育抗體通過注液孔直接注入小室孵育，不需要額外的孵育盒或者雜交袋，更免去剪膜和反復做記號的麻煩，可整張膜進行Western Blot實驗，記錄實驗結果更完整和方便。

操作方法：

n 一抗孵育：

1、打開孵育器，將孵育器的上蓋取下，底板放平，適當調整膠墊位置處于中心位置，并用封閉液將膠墊表面潤濕；

2、將封閉好的整張膜（膜尺寸應該小于膠墊尺寸），輕輕平鋪在膠墊上面，從一面輕輕趕走膠墊與膜之間的氣泡；

3、將孵育器的上蓋輕輕壓在膜上，將長方形液槽一面與膜接觸，膜上彩色Marker條帶置于對應槽正中位置，均勻擰緊四角緊固螺絲（緊固到液孔槽加入液體不流出或者流串到其他液孔槽為宜），液孔槽與膜之間形成空腔液槽小室；

4、將對應抗體工作液分別通過對應液槽背面任意一端的注液孔輕輕注入液槽小室，抗體工作液一般的注入量不超過液槽小室總容積的3/4；

5、抗體工作液注入之后可將整個孵育器平放在搖床震蕩孵育（振幅不可過強），也可以平放在合適的溫度靜置孵育；

6.孵育完成后，將孵育器向任一注液孔側傾斜，將抗體工作液倒掉，吸盡孔緣殘留抗體工作液；

7.從另一側注液孔分別加入洗滌液，盡可能加滿（注意不要串孔），浸泡3-5分鐘按照步驟6傾倒抗體工作液的方法傾倒洗滌液；

8.重復步驟7 ，3-5次；

n 二抗孵育

如果整張膜所使用的二抗相同，此時可將孵育器拆開取出整張膜在孵育盒中進行二抗孵育。

9.傾倒掉洗滌液，并吸干孔緣殘液，通過注液孔分別注入對應二抗，重復步驟5-8。

n 底物顯色

10.松開緊固螺絲，取下上蓋，拆開孵育器，取下整張膜放在洗滌液里洗滌3次；

11.膜平放在干凈顯色板上，加入底物曝光或通過化學發光儀拍照記錄圖片。