AAV介導shRNA干擾
簡介
腺相關病毒（Adeno-associated Virus, AAV）屬于細小病毒科（parvoviridae），是迄今發現的一類結構最簡單且無法自主復制的線性單鏈DNA缺陷型病毒，對分裂的細胞和非分裂細胞均具有感染力。研究中采用的重組腺相關病毒載體（Recombination adeno-associated virus, rAAV）是在非致病的野生型AAV的基礎上改造的基因載體，具有種類多樣、免疫原性低、安全性高、宿主范圍廣、擴散能力強、體內表達基因時間長等特點，已被廣泛的應用在動物水平的基因表達、基因操作和基因治療，rAAV被視為最有前途的基因研究和基因治療載體。
RNA干擾（RNA interfering, RNAi）現象是由靶基因RNA序列與其互補的單鏈siRNA形成的RISC（RNA介導的轉錄沉默復合物）結合引發的廣泛存在于生物體內的序列特異性基因轉錄后的沉默過程。由于RNAi具有高度的序列專一性，可以特異地沉默基因，從而獲得基因功能喪失或基因表達量的降低。因此可以作為功能基因組學研究的一種強有力的工具。在實際應用中，通過AAV病毒載體表達shRNA進行RNAi已經非常成熟，能夠有效、快捷和持久地干擾體內基因的表達。廣泛應用到基因功能研究，藥物靶點篩選，細胞信號傳導通路分析和疾病治療等方向。
應用
1．基因功能研究：RNAi具有高效特異性抑制基因表達的特點，運用AAV介導shRNA干擾可以調控基因表達，進而研究基因功能；
2．信號通路研究：AAV介導shRNA干擾具有宿主范圍廣，干擾能力強，持續時間長等特點，可以運用該技術進行體內體外相關信號通路及作用機制的研究；
3．構建疾病模型：通過AAV介導shRNA干擾可構建轉基因小鼠模型；
4．基因治療：AAV介導shRNA干擾被用于基因表達異常升高引起的疾病，如：腫瘤和病毒感染等；
5．藥物開發：利用RNAi特異性高效地抑制基因的表達，獲得基因功能抑制表型，進而大規模地篩選出基因靶點，從而實現短時間內藥靶在細胞水平和動物水平的篩選和評定。
產品優勢
樞密產品：

優勢：

載體種類多：廣譜性和特異性干擾載體全，滿足您的需求；
安全性高：目前未發現AAV對人體有致病性；
免疫原性低：感染AAV的細胞，很少被免疫系統清除；
感染譜廣：幾乎所有處于分裂和非分裂的細胞均可被AAV感染；
擴散性強：可穿透血腦屏障，是最理想的神經元和膠質細胞感染工具；
高穩定性：對氯仿等試劑有抗性；
特異性強：rAAV有十幾種常用血清型，對不同的臟器有較高的識別及感染能力；
表達時間長：rAAV在組織中最長可持續表達6個月以上。
服務內容
1：設計干擾序列：設計三條干擾序列或客戶提供干擾序列；
2：干擾載體構建以及篩選檢測；
3：rAAV干擾病毒包裝與純化；
4：滴度檢測。
服務流程

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客戶提供
1：干擾的目的基因模板（質粒/菌液）或基因序列（序列/ID）；
2：病毒類型選擇以及要求；
3：血清型選擇。
最終交付
1：載體構建報告；
2：合同約定的rAAV病毒量；
3：rAAV質檢報告。
案例展示

1. Lewandowski等人用AAV介導表達shRNA抑制成年大鼠的PTEN的表達，導致核糖體蛋白pS6磷酸化增加。

? 圖1 成年大鼠皮質內注射AAV抑制PTEN的表達。（Lewandowski, et al., Journal of Neuroscience, 2014）

? ? 2.Saal等人用AAV表達shRNA抑制ROCK2的表達，可減輕多巴胺能神經元在毒素誘導的帕金森病模型中的退變。

圖2 AAV介導的shRNA體外特異性抑制ROCK2表達（Saal et al., Neurobiology of Disease, 2015）
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參考文獻
1.?Lewandowski, G., and Steward, O. (2014). AAVshRNA-mediated suppression of PTEN in adult?rats in combination with salmon fibrin administration enables regenerative growth of corticospinal axons and enhances recovery of voluntary motor function after cervical spinal cord injury. The Journal of neuroscience : the official journal of the Society for Neuroscience 34, 9951-9962.
2.?Saal K A , Koch J C , Tatenhorst L , et al. AAV.shRNA-mediated downregulation of ROCK2 attenuates degeneration of dopaminergic neurons in toxin-induced models of Parkinson\"s disease in vitro and in vivo[J]. Neurobiology of Disease, 2015, 73:150-162.