細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎實驗手段。常用的檢測細胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測是Brdu方法的升級和突破。EdU（5-溴-2-脫氧尿嘧啶）是一種嘧啶類似物，可在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點擊”反應，一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價反應。

試劑盒中EdU試劑含有炔烴，而Yefluor 594 Azide染料試劑含有疊氮化合物。點擊法的EdU標記增殖快速有效，易于使用。只需少量的疊氮化染料即可有效地標記出整合的EdU。標準化的戊二醛固定和去污劑促滲可以使檢測試劑進入細胞，而Brdu方法則需要DNA變性（如酸變性、熱變性或者用DNase消化）去暴露BrdU從而方便BrdU抗體結合。

本試劑盒包含EdU法檢測所需要的所有組份，可以檢測細胞增殖與細胞周期分析，適用于熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測。對于細胞周期的分析，試劑盒提供了細胞核染料Hoechst 33342。

-25~-15℃避光儲存，有效期1年。開封后，組分A（10 mM EdU）需-25~-15℃儲存，組分B（Yefluor 594 Azide）需-25 ~-15℃避光儲存，其余組分2-8 ℃存儲即可。

Q:可以做體外嗎？客戶樣本是組織。細胞樣本可以嗎？

A: 體外是可以，但是組織不可以，必須要保證能增殖，有DNA 合成。能進行增殖的細胞就可以。

Q: EdU 和Brdu 檢測區別？

A: BrdU 免疫檢測需要變性DNA 后才能與抗體結合，而 EdU 因為其特有的炔羥基團可以與一些熒光染料發生“Click”化學反應，無需變形，從而將細胞標記上熒光，因此應用更廣泛。

Q:能否在活細胞中進行 Click-iT EdU 檢測？

A: 不可以。雖然 EdU 是對活細胞進行代謝標記，但是疊氮化物檢測試劑和緩沖液組分是細胞非透過型，檢測信號時的Click 反應必須在固定和通透的樣品上進行。

Q: 觀測到較高的本底干擾，這是什么原因所致？如何減少本底干擾？

A: 疊氮化物和炔烴類間 Click 反應非常有選擇性，生物體內幾乎不可能有副反應發生，所以本底較高一般是由洗滌不充分造成的。減少本底干擾的最佳方法是增加BSA 洗滌的次數。同時， 也可在同樣的檢測條件下設置一組同等處理的無染料或無Click 反應對照，以排除自發熒光干擾。此外，您還可在無 EdU 體系中進行完整的 Click 反應，驗證Click 反應信號的特異性。

Q: 為什么標記樣品無信號或特異性信號非常低？如何提高信號？

A:

1. 請保證試劑使用時為無色的狀態，不要使用已經變黃的添加劑或緩沖液；
2. 為確保 Click 反應試劑能夠到達核內，細胞需要充分地固定和通透；
3. 由于銅離子能結合到部分試劑上，這會導致催化 Click 反應的有效濃度降低。所以在 Click 反應前，不要在任何緩沖液或試劑中引入金屬螯合劑（例如 EDTA、EGTA、檸檬酸鹽等），對某些含有這些物質的實驗樣品來說，進行Click 反應前，可能需要增加額外的洗滌步驟；
4. 當銅離子在合適的化合價時，Click 反應才有效。Click 反應中用到的銅離子為二價銅(Cu2+)。
5. 延長Click 反應的時間至超過 30 分鐘也并不會提高信號。建議使用新鮮的Click 反應試劑再次進行 30 分鐘的孵育，可更有效地提高標記效率。