Frdbio?生物素-DNA探針標(biāo)記效率檢測(cè)試劑盒（ECL型）
產(chǎn)品名稱： Frdbio?生物素-DNA探針標(biāo)記效率檢測(cè)試劑盒（ECL型）
英文名稱： Frdbio?生物素-DNA探針標(biāo)記效率檢測(cè)試劑盒（ECL型）
產(chǎn)品編號(hào)： DNA0020T1
產(chǎn)品價(jià)格： null
產(chǎn)品產(chǎn)地： 武漢
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時(shí)間： 2023-12-11T09:37:11
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 趙經(jīng)理
- 地址 : 光谷國(guó)際B座1513
- 郵編 :
- 所在區(qū)域 : 湖北省
- 電話 : 158****4543 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : 2633787800@qq.com
- 二維碼 : 點(diǎn)擊查看
產(chǎn)品介紹：
本試劑盒用于評(píng)估生物素標(biāo)記的DNA的標(biāo)記效率，所采用的方法是將標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測(cè)樣品梯度點(diǎn)樣到尼龍膜，探針結(jié)合的生物素與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，通過(guò)ECL化學(xué)發(fā)光，底片曝光或者ECL化學(xué)發(fā)光成像儀記錄灰度值，亦可以使用DAB或AEC沉淀型底物，根據(jù)灰度值的比對(duì)，估算出標(biāo)記樣品的標(biāo)記效率，標(biāo)記效率低于30%為標(biāo)記不合格。
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本試劑盒亮點(diǎn)：
1.?本試劑盒操作簡(jiǎn)單，2小時(shí)可以完成標(biāo)記效率測(cè)算
2.?試劑盒備齊所需的試劑組分，不需要額外準(zhǔn)備其他的材料。
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試劑盒已經(jīng)提供材料：
尼龍膜（8cm*12cm）?????? ????2塊
鏈霉親和素-HRP（1000X）? ????20ul
ECL化學(xué)發(fā)光底物A??????? ????2.5ml
ECL化學(xué)發(fā)光底物B???????? ???2.5ml
Biotin-DNA Control (10nM)?? ?200μl
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實(shí)驗(yàn)室需要具備：
紫外交聯(lián)儀（254nm）或超凈工作臺(tái)紫外燈，或手提式紫外檢測(cè)儀（燈）；
化學(xué)發(fā)光CCD或膠片曝光暗室。
注意：如果實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有化學(xué)發(fā)光CCD或膠片曝光暗室可以選擇生物素DNA探針標(biāo)記效率檢測(cè)試劑盒（DAB型）或生物素DNA探針標(biāo)記效率檢測(cè)試劑盒（AEC型）
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其他需要自備試劑材料：
2??移液器及吸頭
2??PBS(pH 7.2)
2??去離子水
試劑盒儲(chǔ)存
鏈霉親和素-HRP和Biotin-DNA Control(10nM)在-20℃儲(chǔ)藏，其他組分4℃儲(chǔ)藏。
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試劑盒操作流程
1.???將10nM Biotin-DNA Control，用TE依次梯度稀釋成5nM、2.5nM、1nM、0.5nM和0.25nM作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品;
2.???取2-3ul已經(jīng)標(biāo)記的的生物素標(biāo)記DNA探針，用TE稀釋成10nM待檢測(cè)。取出適量的10nM生物素標(biāo)記的DNA探針，依次稀釋成5nM、2.5nM、1nM、0.5nM和0.25nM。
3.???取去試劑盒內(nèi)尼龍膜,剪成合適大小，并做上標(biāo)記，將以上步驟1和步驟2已經(jīng)稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品和待測(cè)的生物素標(biāo)記的DNA探針依次點(diǎn)在膜上，每個(gè)點(diǎn)位點(diǎn)2ul;可按下表的排列順序點(diǎn)膜。
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DNA濃度 |
10nM |
5nM |
2.5nM |
1.25nM |
0.625nM |
0.312nM |
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點(diǎn)膜體積 |
2ul |
2ul |
2ul |
2ul |
2ul |
2ul |
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DNA總量 |
20fmol |
10fmol |
5 fmol |
2.5 fmol |
1.25fmol |
0.625fmol |
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Biotin-DNA ? Control |
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待測(cè)Biotin-DNA探針 |
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4.???按照上圖點(diǎn)樣后，充分自然晾干；
5.???紫外交聯(lián)儀或者紫外燈照射10分鐘,距離不少于10cm,如果沒(méi)有紫外燈或者交聯(lián)儀直接放在超凈工作臺(tái)。
6.???放入1% BSA-TBST中封閉半小時(shí)；
7.???加入鏈霉親和素-HRP工作液（使用前1:1000稀釋），結(jié)合半小時(shí)；
8.???TBST洗滌3次，每次3分鐘；
9.???取等體積ECL A組分和ECL B組分，混合后，滴加在膜上，立即膠片曝光或者化學(xué)發(fā)光成像儀記錄圖片。
10.??如果實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有化學(xué)發(fā)光成像記錄儀或者膠片曝光條件，可以選用DAB底物或者AEC底物顯色后。
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結(jié)果判讀與分析：
如果可以通過(guò)圖像讀取灰度數(shù)值，則可以建立Biotin-DNA Control的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)Biotin-DNA探針濃度值，用計(jì)算得到的數(shù)值除以該點(diǎn)位DNA總量值，即可得到生物素標(biāo)記效率；例如，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算到待測(cè)Biotin-DNA探針第2個(gè)點(diǎn)的值為7.5fmol，那么7.5/10=75%,即標(biāo)記效率為75%。
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如果沒(méi)有灰度分析儀，也可以通過(guò)肉眼觀察比對(duì)估算標(biāo)記效率，如：待測(cè)Biotin-DNA探針第2個(gè)點(diǎn)的灰度與Biotin-DNA Control的第4個(gè)點(diǎn)灰度值相似，則待測(cè)Biotin-DNA探針第2個(gè)點(diǎn)實(shí)際的生物素標(biāo)記DNA探針為2.5fmol，而待測(cè)Biotin-DNA探針第2個(gè)點(diǎn)的總DNA量為10fmol,所以，2.5/10=25%,，通過(guò)肉眼估算得到結(jié)果比較粗糙。
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注意事項(xiàng)：
1.???如果標(biāo)記效率低于30%，用于后續(xù)檢測(cè)通常是不合格的。
2.???由于TdT可以催化DNA 3'端添加多個(gè)Biotin-11-dUTP,所以有時(shí)候，很可能測(cè)算出來(lái)的標(biāo)記效率數(shù)值大于100%。