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ELISA的血樣本在收集、處理和保存方面要考慮的幾個(gè)問題

(1)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。

(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染。一是細(xì)菌的生長所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二是一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

(3)血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2～8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。

(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。

(5)要注意避免出現(xiàn)溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。

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