SHuffle T7 E. coli感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

SHuffle T7 E. coli?菌株是?K12?的衍生菌株。該菌株的染色體中整合了一個拷貝的二硫鍵異構酶?DsbC?基因?，可以促進含有二硫鍵蛋白的正確折疊；此外?DsbC?還是一個分子伴侶，可以幫助不含二硫鍵蛋白正確折疊，形成正確構象，同時該菌株可降低目的基因的本底表達，適合于毒性基因的原核表達。SHuffle T7 E. coli?菌株染色體中整合了一個拷貝的T7 RNA?聚合酶基因，可以表達噬菌體?T7 RNA?聚合酶，適合于?T7?啟動子誘導的蛋白表達；該菌株還可以表達大腸桿菌?RNA?聚合酶，所以可用于?pET?系列，pGEX，pMAL?等質粒的蛋白表達。SHuffle T7 E. coli?菌?株具有抗?T1?噬菌體感染的特點，具有鏈霉素，壯觀霉素抗性。SHuffle T7 E. coli?感受態細胞由特殊工藝制作，?pUC19?質粒（2686bp，AmpR）檢測轉化效率>10⁸?cfu/μg DNA。

基因型：F′?lac, pro, lacIq /?Δ(ara-leu)7697 araD13fhuA2 lacZ::T7 gene1?Δ(phoA)Pvull phoR ahpC* galE(or U) galKλatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, laclq)?ΔtrxBrpsL150(Str R)Δgor?Δ(malF)3

2.使用說明：

1)．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2)．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。
3)．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。
4)．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。
5)．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1)．剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2)．質粒質量和濃度等的差異會使轉化效率有所下降。

*本試劑僅供實驗室研究使用