在進行表達載體的構建、目的蛋白質的表達等實驗時，通常需要獲得一段目的基因。我們可以根據您提供的已知參考序列 (NCBI上已發表)，以基因組DNA或總RNA為模板，獲取您所需要的某個區域的一段基因，并將之與克隆載體進行體外連接，然后再轉化到宿主菌中進行克隆、篩選，以此獲得質粒重組體。

一、服務內容

1. 基因釣取

8基因組DNA/總RNA的提取

8以基因組DNA為模板通過PCR擴增得到目的基因

8以總RNA為模板通過RT-PCR擴增得到目的基因

8目的基因PCR產物的純化及測序

8目的基因的克隆及測序

2. 基因克隆

8目的基因的轉載體：將含有目的基因的質粒采用雙酶切的方法克隆至商品化的表達載體或改造后的特殊載體上。

8如果客戶提供PCR產物進行亞克?。何覀兘ㄗh先進行TA克隆，再進行亞克隆。

8目的基因的PCR克?。簩⒛０澹ㄍǔ橘|粒）上的一段序列通過PCR加酶切位點后克隆至商品化的表達載體或改造后的特殊載體上。

8對已有載體進行改造。

二、實驗步驟及周期

8從動物組織或細胞中獲取gDNA或者cDNA；2～3個工作日。

8PCR擴增相關基因或功能元件，連接至T載體測序；8～9個工作日。

8將測序后符合要求的基因或功能元件片段亞克隆至目的載體；10個工作日。

三、基本費用

1. 基因釣取

擴增的基因或功能元件大小在1.5k以內，800元；
片段大小在1.5k～2.5k，1200元；
片段大小在2.5k～3.0k，1600元。

注: 1). 以上實驗費用及周期是針對正常實驗樣品制定的，樣品特殊(包括樣品中基因豐度較低、核酸含量較少或者所需調取基因較長的樣品等)或樣品多時除外。

2). 亞克隆費用請參見亞克隆部分（如客戶只需要連接在T載體上的基因或功能元件片段，此費用可免）。

2. 基因克隆

根據客戶要求將指定片斷按照相應的方向和讀框裝入指定表達載體，如克隆位點無特殊要求，我們將自行選擇合適的酶切位點

注：1、以上價格均不含測序的費用，如需測序，費用另計；

2、我們僅提供TA克隆載體（載體為pMD18-T），除此以外的載體需自己提供;

3、以上實驗費用是針對DNA片段長度小于2 kb的情況制定的，若DNA片段長度超過2 kb時，具體

價格請來電咨詢；

4、非常用限制性內切酶由客戶自己提供，或我們幫忙訂貨，費用客戶自理，剩余產品返回。

四、交貨內容

8實驗報告(包括實驗操作步驟、圖片、引物序列等)、

8測序彩色波形圖、序列堿基圖

8保存電子版結果的CD光盤

8含有目的基因的重組質粒及甘油菌、引物等

五、客戶須知

1. 基因釣取

8我們目前接收的樣品形式為與參考序列物種一致的材料或上述材料的基因組DNA/總RNA。

8實驗材料必須保證新鮮，請您采樣后立即放入液氮中速凍或加入樣品穩定劑

8基因組DNA/總RNA無明顯降解，總量大于5 μg。基因組DNA濃度大于10 ng/μl，總RNA濃度大于200 ng/μl。如果基因豐度較低或調取的基因較長，請您提供盡量多的材料。

8由于材料的個體差異及PCR過程中會產生突變等原因，我們不保證獲取的基因與參考序列的堿基完全一致。

2. 基因克隆

8請提供目的DNA的來源及背景資料，TA克隆須提供PCR原液50ul以上或DNA模板及相應的上下游引物;亞克隆須提供原始模板（質粒圖譜、酶切位點、測序報告等）和目的載體及信息(質粒圖譜)。

8如果所提供模板需本公司進行PCR擴增時，我們將采用高保真DNA聚合酶進行PCR反應，但不承諾測序結果與參考序列的堿基完全一致。

8我們僅保證克隆到載體的基因片段為您所提供的基因，所以請事先對目的基因進行驗證，確保模板的準確性；如果您想對PCR產物進行亞克隆，我們建議先進行克隆測序。

8由于某些基因在克隆載體或表達載體中會有表達，而表達產物會抑制宿主菌生長。因此，我們不保證所有的基因都能夠成功進行克隆或者亞克隆。