快速過(guò)濾法質(zhì)粒超大量10提取試劑盒（10preps)-核酸純化-試劑-生物在線

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Biomiga（中國(guó)）
快速過(guò)濾法質(zhì)粒超大量10提取試劑盒（10preps)

快速過(guò)濾法質(zhì)粒超大量10提取試劑盒（10preps)

商家詢價(jià)

產(chǎn)品名稱： 快速過(guò)濾法質(zhì)粒超大量10提取試劑盒（10preps)

英文名稱： Plasmid ezFilter mega 10 kit

產(chǎn)品編號(hào)： PD1614-02

產(chǎn)品價(jià)格： 0

產(chǎn)品產(chǎn)地： 美國(guó)圣地亞哥

品牌商標(biāo)： Biomiga

更新時(shí)間： null

使用范圍： null

Biomiga（中國(guó)）
  • 聯(lián)系人 :
  • 地址 : 上海市閔行區(qū)吳河路328號(hào)A棟2樓
  • 郵編 : 201109
  • 所在區(qū)域 : 上海
  • 電話 : 400-826-1968 點(diǎn)擊查看
  • 傳真 : 點(diǎn)擊查看
  • 郵箱 : tech@biomiga.com.cn

試劑盒組分：
Catalog#
PD1614-02
Preps
10
DNA Unit
10
Filter Unit
10
Replacement Cup
10
Buffer A1
2 x 530 mL
Buffer B1
2 x 530 mL
Buffer C1
3 x 450 mL
Buffer KB
530 mL
RNase A (20 mg/mL)
120 mg(4 x1.5 mL)
Elution Buffer
270 mL
User Manual
1
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保存條件：
?
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項(xiàng)：
  1. 質(zhì)粒拷貝數(shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
  2. 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。
  3. 柱結(jié)合能力：10 mg
操作簡(jiǎn)明步驟：
  1. 取500 μL新鮮的菌液接種到1,200-1,500 mL (勿超過(guò) 2,000 mL)的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
  2. 加入100 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。
  3. 加入100 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
  4. 加入120 mL Buffer C1,立即反轉(zhuǎn)幾次至出現(xiàn)絮狀白色沉淀。渦漩震蕩10 秒。充分混勻后，溶液將會(huì)變得顏色均一，如果此時(shí)溶液顏色不均一，均局部顏色過(guò)深，建議將溶液輕甩幾次，以充分混合溶液，室溫下靜置10分鐘。
  5. 將雙層Filter unit與500 mL或1000 mL的滅菌瓶(Corning# 430518 or 430282 or equivalent) 連接，旋緊，再將此裝置與真空負(fù)壓裝置連接。
  6. 先將步驟“5”中底部較澄清的裂解產(chǎn)物用50 mL移液管轉(zhuǎn)移至雙層Filter unit中，靜置5分鐘后打開(kāi)真空裝置，使負(fù)壓由低到高，5分鐘后增至最大（0.04 Mpa）。
  7. 當(dāng)大部分裂解液已被過(guò)濾時(shí)，關(guān)掉真空負(fù)壓裝置，等候1分種，拆卸裝置，移去雙層Filter unit。
  8. 再將DNA unit杯與一個(gè)新的滅菌的500 mL或1000 mL的滅菌螺口標(biāo)準(zhǔn)瓶連接，旋緊。并將過(guò)濾嘴與真空負(fù)壓裝置連接。將步驟“7”中收集到的裂解液中加入120 mL 100%乙醇，立即混合均勻，立即將一半倒入DNA unit杯中，開(kāi)啟負(fù)壓裝置，進(jìn)行過(guò)濾吸附操作。
  9. 再將剩下一半倒入DNA unit杯中，當(dāng)所有裂解液已過(guò)濾完，再維持真空1分鐘后，關(guān)掉負(fù)壓裝置。
  10. 在DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB，開(kāi)啟負(fù)壓裝置至最大（0.04Mpa）并維持1分鐘，使Buffer KB完全通過(guò)DNA Unit杯。
  11. 在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇，開(kāi)啟負(fù)壓裝置至最大（0.04Mpa）并維持1分鐘，使乙醇完全通過(guò)DNA Unit杯。重復(fù)此操作步驟一次。
  12. 在DNA Unit杯中加入80 mL100%乙醇，開(kāi)啟最大負(fù)壓維持1分鐘，關(guān)掉負(fù)壓裝置，倒掉瓶子中的廢液，將DNA Unit杯重新連接至標(biāo)準(zhǔn)瓶上，開(kāi)啟負(fù)壓裝置至最大負(fù)壓，真空抽20分鐘，以充分去除殘留的乙醇。
  13. 關(guān)掉負(fù)壓裝置，靜置一分鐘，移去標(biāo)準(zhǔn)瓶，將DNA Unit 連接至一個(gè)新的50 mL的離心管中，并旋緊。
  14. 加入12 mL 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室溫放置2分鐘，打開(kāi)負(fù)壓裝置至最大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時(shí)會(huì)收集到5~6 mＬ洗脫液，這是1st 洗脫液。
  15. 關(guān)掉負(fù)壓裝置，將DNA Unit連接至一個(gè)新的50mL的離心管中，加入12 mL? 滅菌 ddH2O或者Elution Buffer到DNA Unit杯的膜上，室溫靜置2分鐘，開(kāi)啟負(fù)壓裝置至最大（0.04 Mpa）洗脫DNA。此時(shí)會(huì)收集到約8-10 mL洗脫液，這是2nd洗脫液。

操作流程：