Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

WST-8屬于MTT的升級產品，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產物（formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nm波長處測定OD值，間接反映活細胞數量。

CCK-8法應用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。

操作簡單：產品本身是液體，即開即用；甲臜產物是水溶性的，不需要用有機溶劑溶解。

靈敏度高：線性范圍廣，靈敏度高，重復性好。

細胞毒性低：細胞毒性非常低，對后續實驗沒有影響。

穩定性好：培養液中酚紅和血清的存在不會對檢測造成影響。

應用性廣：可用于大規模、高通量樣品檢測。

同類產品性能比較：

細胞類型：293T人胚腎細胞；培養基：10% FBS 高糖DMEM培養基

孵育時間：3h；細胞數目：1000

引用已發表文獻數據：

GIST-T1細胞增殖檢測CRTL為空白對照組，Lv-shNC為陰性干擾組，Lv-shOrai1為Orai1敲除組	ROS17/2.8細胞增殖檢測WT為野生型，KO為BK基因敲除組
rMSCs細胞活性檢測在2.5,5,10,20ug/mL的濃度 G/SWCNT hybrids, G, and SWCNTs處理下的細胞活性檢測	rMSCs細胞增殖檢測G/SWCNT hybrids 在2.5,5,10,20ug/mL的濃度下處理1,3和7天細胞活性檢測
Huh6細胞干擾EZH2基因和陰性對照組細胞活性檢測	HepG2細胞干擾EZH2基因和陰性對照組細胞活性檢測
GIST-T1 細胞活性檢測分別在2-APB 不同濃度0, 50, 100, and 150µM處理下的細胞活力檢測	GIST-T1 細胞活性檢測分別在SKF-96365不同濃度下0, 0.5, 1.0, and 1.5µM處理下胞活力檢測

冰袋運輸,-25~-15“C避光干燥保存,有效期2年。

Q：CCK-8 的保存和穩定性如何？

A：CCK-8 穩定性高，避光條件-20℃有效期 2 年，4℃有效期 1 年。經常使用建議 4℃ 保存，避免反復凍融。CCK 正常顏色為粉紅色，若顏色發生明顯偏差，質量可能有發生變化。

Q：CCK-8 的細胞毒性如何？

A：CCK-8 毒性非常低，因此 CCK-8 檢測完后相同的細胞還能用于其它細胞增殖檢測如結晶紫染色法，中性紅染色法或 DNA 熒光染色法。

Q：CCK-8 會對活細胞進行染色嗎？

A：不會，首先 WST-8 不會進入細胞染色，整個顯色反應都是在培養體系中進行的。另外 WST 和 WST-8 甲臜都屬于高度水溶性組分，反應結束更換新的培養液，即可清除外源組分。因為 CCK-8 是基于 WST-8 能夠被線粒體內的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色甲臜產物（Formazan）的原理研制開發的，因而不會對細胞進行染色。

Q：培養基的本底顏色如酚紅會不會影響細胞活性的檢測呢？

A：不會的，培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

Q：在加入 CCK-8 時可否不更換培養基？

A：一般情況下可以不更換培養基。但是如果培養基里有氧化還原性物質的話，有可能會產生誤差，必須更換其它培養基。

Q：在實驗中OD 值太高或者太低，怎么解決？

A：太高可以縮短加入CCK-8 后的培養時間。例如：可以把加入CCK-8 試劑后的培養時間由 2 小時縮短為 1 小時。此外，可適當減少細胞的數量。太低可以采取 2 個辦法： 1、適當增加細胞數量 2、延長加入CCK-8 試劑后的反應時間。

Q：哪些物質會影響 CCK-8 的實驗測定結果？

A：當培養體系內含有還原性物質存在時會還原 WST-8，從而使 OD 值增加；當有氧化性物質存在時會抑制還原反應進而使 OD 值減小。

Q:做細胞毒性實驗，我的細胞都死了，為什么我加入CCK8試劑后檢測的OD值和對照組OD值差不多？

A:①細胞凋亡或者死亡之后乳酸脫氫酶被釋放到細胞培養液中，可以長期存在，從而導致檢測的OD值偏大。再次說明細胞的活性和OD值并不能完全劃等號。建議客戶在加入CCK8的時候更換新的培養基，確保得到準確的結果。

②加入細胞中的檢測藥物是還原性的，從而導致OD值偏高。建議加入CCK8的時候更換新的培養基。

Q：對照組（培養基+CCK8）的值很高，是為什么呢？

A：可以測一下培養基是否含有氧化還原物質，可能是培養基中的物質引起的。

Q:  細胞不貼壁可以測活性嗎？預培養是必須的嗎？

A: 需要預培養，如果要向保持細胞的最好狀態，建議預培養細胞。如果不做細胞預培養 ，細胞內的脫氫酶可能會不穩定。若不做細胞預培養，需在做標準曲線和檢測時需要統一檢測條件。

Q: CCK-8能否檢測細菌細胞？

A: 可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。向100μl E.coli培養液中加入10μl CCK-8溶液，并培養1-4個小時或過夜。

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